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目的:观察大鼠鼻呼吸黏膜固有层内的外胚层间充质干细胞来源的神经干细胞在纤维蛋白支架中的增殖、分化情况,并评价外胚层间充质来源的神经干细胞-纤维蛋白支架复合体移植修复大鼠脊髓急性横断性损伤的疗效。方法:(1)获得SD大鼠活体鼻呼吸黏膜固有层组织,于体外培养,利用反复贴壁细纯化法对组织内的外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)进行纯化,并在体外对其进行扩增。用神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导培养基将纯化增殖后的EMSCs进行诱导培养,使其成为类神经干细胞。(2)EMSCs源NSCs于纤维蛋白胶铺底的24孔板/6孔板中培养(作为F-N组),同时设置对照组(Control组),除不用纤维蛋白胶铺底外,其余培养条件均相同。2周后对两组细胞行免疫荧光染色,观察其生长、分化情况,并利用Western blot技术评价分析两组细胞的神经丝蛋白200(NF200)以及神经生长相关蛋白43(GAP43)的表达水平并做比较。(3)制作大鼠脊髓T10段横断模型,SD大鼠(清洁级)60只随机分为三组:EMSCs源NSCs-纤维蛋白支架复合体移植组(作为N-F组)、纤维蛋白支架移植组(Fg组)和单纯手术组(SCI组)。术后每周对大鼠行双盲Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分,并于移植术后12周获取断端脊髓组织标本,免疫组织化学染色观察再生情况,并利用Western blot技术检测脊髓横断部位标本的GAP43、NF200、突触蛋白(synapsin)的表达水平,三组间进行比较。结果:(1)鼻呼吸黏膜固有层组织可纯化培养出EMSCs,并且其可在体外培养、扩增,免疫荧光显示其CD105、CD44、nestin、vimentin等标志蛋白阳性。EMSCs源NSCs在体外扩增良好,免疫荧光染色结果显示其具有明显的神经干细胞表型(高表达nestin、CD133)。(2)F-N组EMSCs源NSCs球在纤维蛋白胶内生长良好,并可分化为类神经元细胞,细胞向周围空间发出突起,且突起间结构相互联系。与对照组相比,免疫荧光显示其分化出的类神经元细胞数量多,突起相对较长,突起间连接更复杂。Western blot结果显示NF200、GAP43表达水平两组有显著差异(P<0.05)。(3)BBB评分显示,从术后2周开始至12周实验结束,N-F组BBB评分每周均高于Fg组和SCI组,并且统计学差异显著(p<0.05)。Fg组动物运动功能也有所改善,但程度有限。SCI组动物运动功能几乎无改善。Western blot技术检测显示N-F组动物脊髓标本NF200、GAP43、synapsin相对表达量均高于Fg组和SCI组,且差异有统计学意义(P<0.05)。脊髓组织切片免疫组化显示脊髓断端N-F组可见大量阳性神经纤维呈网络状结构,并伸入断端两侧脊髓实质;Fg组有较少量纤维通过,但不成网络;SCI组断端组织破溃,几乎没有阳性纤维通过。结论:(1)大鼠鼻呼吸黏膜固有层组织可分离纯化出EMSCs,并可在体外获得良好的扩增。EMSCs可在适宜的条件下诱导为NSCs表型的细胞。(2)纤维蛋白支架对鼻呼吸黏膜EMSCs源NSCs的生长分化具有良好的促进作用,是理想的修复脊髓损伤的支架材料。(3)EMSCs源NSCs对损伤后脊髓组织的组织学重建和功能学恢复均具有良好的促进作用。