长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是专性吸血的体外寄生虫,在自然界中存在两性生殖种群与孤雌生殖种群,可携带多种病原体而导致疾病,给人类健康和畜牧业生产带来极大危害。防御素(defensin)是一种抗微生物肽,在动植物中广泛存在,尤其在节肢动物中,由于缺乏适应性免疫反应,防御素在其先天免疫防御过程中发挥重要作用,可以有效对抗入侵的病原体。蜱作为专性吸血的特殊类群,同样具有防御素家族多肽以抵御微生物或病原体的侵袭。本研究以长角血蜱孤雌生殖种群为研究对象,利用Clontech建库试剂盒和3’RACE的方法构建cDNA文库,分子克隆得到三条防御素基因,分别命名为Hp-defensin-1、Hp-defensin-2和Hp-defensin-3。开放阅读框大小分别为225bp、210bp和237bp,编码氨基酸个数为74、69和78,成熟肽长度分别为38、37和46,等电点分别为9.69、8.33和9.50。通过对Hp-defensin-1进行原核表达及功能分析,结果表明,长角血蜱Hp-defensin-1与边缘革蜱(ACJ04433.1)同源性最高,为75.68%。系统发育树表明,Hp-defensin-1基因序列与革蜱属(森林革蜱KJ885301.1)亲缘关系最近。荧光定量结果表明,Hp-defensin-1表达量在不同时期和不同组织存在显著性差异(P<0.05),大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌胁迫效果依次减弱。将Hp-defensin-1连入载体pET-32(a+),并转入BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE电泳显示目的蛋白大小约23kDa,与预测大小一致。该多肽对革兰氏阳性菌具有广谱抗菌性,对部分革兰氏阴性菌和真菌也具有一定的抗菌活性。表达产物的抗氧化实验表明,该多肽对ABTS·+和DPPH·自由基具有很强的清除能力,具有很强的抗氧化活性,但不存在溶血活性,因此对健康的人血细胞无伤害,为新型抗菌药物的研发提供了基础。