SF/PLCL/Gelma静电纺丝屏障膜的制备与性能研究

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目的:利用静电纺丝混纺技术制备丝素蛋白(silk fibrin SF)/聚左旋乳酸己内酯(poly(L-acitic-co-(?)-caprolactone)PLCL)/甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl Gelma)纤维屏障膜,对比不同Gelma含量的屏障膜的表面形貌、内部结构、亲疏水性、机械性能、降解性能以及细胞毒性和成骨性能的区别,为其在引导骨再生屏障膜领域的应用提供初步数据。方法:采用静电纺丝混纺法,以六氟异丙醇为溶剂,质量比为3:7:X(X=0、2、4、6)的SF/PLCL/Gelma为溶质配成纺丝液,其中SF/PLCL的质量体积分数为8%,加载11Kv的电压,针极距为12cm,推进速度0.02ml/min,温度为30℃-35℃,湿度为25%-30%的条件下进行纺丝得到G0、G2、G4、G6四组纤维膜。然后应用扫描电镜观察纤维膜的表面形貌,傅里叶变换红外光谱和X射线衍射检测纤维膜的功能基团和晶体构象,接触角测试样品的亲疏水性,拉力试验机测试样品的机械性能,降解实验检测纤维膜的降解性质。利用全骨髓贴壁法提取兔的骨髓间充质干细胞(rabbit Bone marrow Mesenchymal Stem Cells r BMSCs),然后利用FDA染色实验检测r BMSCs在纤维膜上的黏附情况,利用CCK-8实验检测r BMSCs在纤维膜上的增殖情况,利用碱性磷酸酶定量检测实验测定纤维膜对r BMSCs的成骨分化的影响。结果:1.扫描电镜结果显示各组纤维膜表面光滑、连续,粗细均匀,无明显串珠样缺陷,各组纤维排列无序呈三维网状,G2、G4、G6组纤维直径与G0组之间均存在显著的统计学差异。2.傅里叶变换红外光谱结果显示,四组纤维膜均有SF和PLCL的特征峰位,G2、G4、G6组有Gelma的特征峰位,表示Gelma成功纺进了纤维膜中且没有变性。3.X射线衍射结果显示,SF和PLCL的衍射峰在四组纤维膜中均有表达,Gelma材料的加入可能引起丝素蛋白的衍射峰轻度左偏(降低)。4.接触角测试结果显示,各组纤维膜均属于亲水性膜,Gelma材料的引入降低了纤维膜的亲水性,但这种降低程度并不具有显著性,G2组纤维膜的亲水性降低程度最小。5.拉伸试验结果显示,Gelma材料的引入显著增加了纤维膜的拉伸强度,其中G2组纤维膜的拉伸强度最大;还增大了屏障膜的弹性模量,但是差异并不具有统计学意义;另外还降低了材料的断裂伸长率,但只有G6组与对照组之间具有统计学差异。6.降解实验结果显示,各组屏障膜均可降解,前9周的时间内,G0组屏障膜的降解逐渐加速,G2、G4、G6组屏障膜的降解逐渐减速。7.FDA染色实验结果显示,r BMSCs在各组纤维膜上均可以较好地黏附并保持一定的活性。8.CCK-8实验结果显示,各组纤维膜对r BMSCs无细胞毒性,后者能较好地进行增殖,且G2组的细胞增殖速度最快。9.ALP定量实验结果显示,与对照组相比,各组纤维膜的ALP活性值轻度升高但并没有显著促进r BMSCs成骨分化的能力。结论:利用静电纺丝技术成功制备了SF/PLCL/Gelma的纤维屏障膜,溶质质量比为MSF;MPLCL:MGelma=3:7:2的G2组的亲水性能较好,机械性能优异,降解时间更符合临床要求,生物相容性佳,可能具有一定的诱导成骨分化能力。具有应用于种植临床的潜力。但是其促成骨分化能力还需要进一步进行验证。
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