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第一部分目的：乳腺癌具有高度异质性,本实验用免疫组化的方法检测乳腺癌相关标志物并划分乳腺癌分子亚型,回顾性研究其临床病理学特征及复发的危险因素,并进一步揭示不同分型病人对治疗的获益情况,为实现以分子分型为基础的乳腺癌个体化治疗提供依据。方法：本实验回顾性分析了2118例原发性、可手术的乳腺非特异性浸润性导管癌的临床病理学特点及治疗情况,所有病例均接受了局部或全身性辅助治疗。免疫组织化学(IHC)方法用来检测入选病例中ER、PR、C-erbB-2、CK5/6、EGFR的表达以确定分子分型,Ki-67的表达进一步应用于luminal A亚型病例中。结果：不同分子亚型乳腺癌在肿瘤大小、组织学分级、分期、淋巴结转移、是否绝经、是否接受过化疗、放疗、内分泌治疗方面具有显著性差异(P<0.05)。生存分析显示,乳腺癌各分子亚型5年总生存期(OS)及无病生存期(RFS)均具有显著性差异(P<0.001)。Luminal A型的复发率最低(12.7%.P<0.001),luminal B、HER2过表达及basal-like型的复发危险递增(15.7%,19.1%,20.9%)。乳腺癌的分子分型是影响乳腺癌OS及RFS的独立性预后因素(P<0.05)。不同分子亚型乳腺癌对治疗的反应不同。Luminal A型患者,辅助性放疗能降低复发的风险性(P=0.005),Ki67阳性表达是一个复发的高危险因子(P<0.001),而在其他高危险因子存在的情况下,辅助性化疗能够降低患者的复发风险(P<0.001)。内分泌治疗是ER阳性患者的一个有效的治疗手段(P<0.001)。结论：乳腺癌的分子分型能够大体上区别不同乳腺癌的复发风险,并且在乳腺癌的治疗方案的制定中有重要意义。乳腺癌分子分型与临床病理学联合的模式在乳腺癌预后研究中比单纯应用临床病理学有着重要的进步。Luminal A型肿瘤可能有着两个不同的分支,其预后及治疗反应都显著不同。第二部分目的检测乳腺癌发生发展模型MCF10细胞系中Nek2B的表达情况；观察重组Nek2B质粒在癌变前细胞系中的作用以及Nek2BsiRNA对癌细胞系的影响；观察Nek2BsiRNA在裸鼠成瘤模型中的应用以及Nek2BmRNA在接受含紫杉醇的新辅助化疗患者中的表达。方法以国内外相关研究为依据,用MCF10A、MCF1OAT、MCF10DCIS.com和MCF10CA1四个细胞系建立乳腺癌发生发展模型。western blot技术检测四种细胞中Nek2蛋白的表达水平,应用细胞转染方法将重组Nek2B质粒与siRNA转入细胞内,采用PCR技术检测细胞中Nek2B的表达情况,流式细胞术、免疫荧光双染色技术、克隆形成实验、MTT实验检测转染前后细胞的不同变化。利用MCF10CA1细胞建立裸鼠成瘤模型,观察Nek2BsiRNA以及化疗药物紫杉醇对裸鼠体内肿瘤生长的影响。观察接受含紫杉醇的新辅助化疗患者术后瘤体内Nek2BmRNA的表达情况与患者对化疗反应的关系以及与患者临床病理学特征的关系。结果1.Nek2及Nek2B在癌前细胞系MCF10A、MCF1OAT中低表达,在癌细胞系MCF10DCIS.com、MCF10CA1中高表达。2.在癌前细胞系中转染重组Nek2B质粒DNA结果显示,与对照组细胞相比,转染组细胞中心体表达情况与细胞周期变化不明显(P>0.05)。在癌细胞系中转染Nek2BsiRNA结果显示,与对照组细胞相比,MCF10DCIS.com转染组细胞中出现大量多核细胞(P<0.05),MCF10CA1细胞转染组细胞增殖能力减弱,且经不同浓度紫杉醇处理24h后,转染组细胞死亡数高于对照组(P<0.05)。3.Nek2BsiRNA处理组的裸鼠肿瘤生长均较PBS组与对照siRNA组减慢(P<0.05),紫杉醇联合Nek2BsiRNA处理组裸鼠体内肿瘤生长较单独应用Nek2B siRNA组与单独应用紫杉醇组明显减慢(P<0.05)；HE染色观察裸鼠肿瘤细胞形态变化结果显示,紫杉醇联合Nek2BsiRNA组裸鼠细胞形态大小不一,较多区域出现大片状坏死细胞,整体上肿瘤细胞较对照组活力明显下降(P<0.05)。4.62例接受含紫杉醇的新辅助化疗患者中,9例患者达到完全缓解(pCR),28例患者达到部分缓解(PR),11例患者达到疾病稳定(SD),14例患者达到疾病进展(PD),Nek2B高表达组仅有15.8%的患者达到PR,却有高达52.6%的患者达到PD(P<0.01)；Nek2BmRNA的表达强度与肿瘤大小、淋巴结状态、组织学分级、以及Ki67的阳性等因素呈正相关(P<0.05),与HER-2状态、ER/PR状态关系无统计学差异(P>0.05)。结论1.Nek2B可能与乳腺肿瘤细胞的恶性增殖与演变有关,可能为乳腺癌细胞分化较差的标志物之一。2.Nek2BsiRNA能够协同化疗药物紫杉醇抑制乳腺癌肿瘤细胞的生长,Nek2B可能成为一个新的乳腺癌治疗靶点,尤其对治疗手段相对较少的三阴乳腺癌患者以及对紫杉醇抗药的患者意义重大。