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猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是以引起妊娠母猪的早产、流产、死胎、木乃伊胎及仔猪咳嗽、呼吸困难、呼吸急促为主要特征的接触性传染病病原。目前,在我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒亚型主要为美洲型。现阶段我国对此病的检测主要为血清学实验、ELISA法、实时荧光定量PCR法等,这些实验方法操作复杂、耗时、易污染并需要昂贵的仪器。胶体金免疫层析试纸条技术是一种无需专业技术人员对少量样品即可检测的快速、简便、费用低廉的检测方法。本研究通过对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒保守性核衣壳蛋白ORF7基因进行克隆、表达及纯化,以此为抗原免疫BALB/c小鼠,制备了抗PRRSV的N蛋白的单克隆抗体,为下一步免疫金试纸条研制奠定了物质基础。本研究根据GenBank发布的PRRSV VR2332株ORF7的全长基因序列,设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出大小为372bp的完整ORF7基因片段(编码PRRSV核衣壳N蛋白),将PCR产物克隆入pMD-18T载体,进行测序分析。测序后的目的片段连接至pET-28a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-28a(+)-N。并对原核表达诱导条件(IPTG浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化,结果在37℃,0.2mmol/L IPTG诱导5h可实现重组PRRSV核衣壳N蛋白的高效表达,蛋白分子大小为22ku,与理论推测的蛋白分子质量一致。该重组蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,经Western-blotting分析显示,猪繁殖与呼吸综合征核衣壳重组N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫活性,以此纯化重组N蛋白为免疫原,按长程方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,纯化的PRRSV全毒为ELISA抗原筛选出1株阳性杂交瘤细胞株,命名为McAb-A7Bl。经ELISA和Western-b1otting验证,McAb-A7B1细胞株上清效价为1：128,制备的腹水效价为1：105,与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应。结果显示该株单克隆抗体具有PRRSV的高度亲和力和特异性。