脂肪酶作为催化剂在工业上被广泛应用,也是生物催化发展过程中一个很大的限制性因素。野生菌株脂肪酶产量低,利用常规育种方法已不能满足工业化生产的需求。本论文根据寄生曲霉脂肪酶基因lipAP序列首次利用两步法合成得到全基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,且对寄生曲霉脂肪酶进行了生物信息学分析,为进一步的理论研究及应用奠定了基础。主要研究结果包括:(1)根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank: AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,优化密码子并设计9对重叠引物,利用改进后的两步法分别合成lipAP的上下游片段,通过重叠延伸PCR连接两片段得到lipAP基因全长序列。(2)将合成的基因构建到pFL-B13cl载体上获得重组表达质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-sumo-Lip AP以包涵体形式表达,大小约将为53kD,且在0.1 mmol/L IPTG、37°C条件下诱导6 h表达量最高。融合蛋白变复性后经疏水层析柱一步纯化,纯度可达95%以上。复性融合蛋白对底物p-NPB的酶活性可达到121 U/mg,蛋白酶UlpⅠ酶切His-sumo-Lip AP结果证实Lipase AP复性成功。(3)利用生物信息学工具预测和分析发现,Liapse AP空间结构保守,具有催化三联体(catalytic triad)、活性部位盖子(active site flag/lid)及亲核弯头(nucleophilic elbow)等三个功能域。系统发育进化分析表明寄生曲霉与米曲霉的进化距离最近。