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作为中药药效物质基础的中药化学成分组成极为复杂。建立一种可系统性、高效、高通量的分离制备中药成分的方法是研究中药药效物质基础的先决条件。色谱技术作为常用的分离制备手段在现代中药研究中扮演着最重要的角色。传统的色谱分离难以实现中药成分高通量、系统性分离制备。在中药成分制备领域,专业化的二维制备色谱分离中药有效成分及其装置的研制尚未见报道,常规的液相色谱在分离制备过程中上样量少,有效部位获得的物质量少和重复性差、系统性及在线操作手段复杂等,制约了中药有效成分的系统性认知、活性成分研究及新药创制。本文在“中药化学成分系统分离策略及设备研究”的基础上,以甘草黄酮富集物为对象,以实验室自主研发的基于分离-富集模式的反相二维色谱仪-制备色谱工厂(Preparative Chromatography Platform,PCP)为手段,色谱分离专家系统软件XTool色谱进行条件优化,通过上样量和富集次数等参数考察,建立了一个可重复获得有效部位,高通量,系统性分离制备甘草中黄酮类化合物的方法。具体结果如下:1.甘草黄酮类化合物的提取与富集。4 kg乌拉尔甘草根粉碎后通过90%乙醇浸透提取,得到甘草黄酮提取物598 g。通过利用对黄酮类化合物有特异性吸附的聚酰胺色谱填料和LH20葡聚糖凝胶色谱填料进行富集除杂,得到甘草黄酮富集物17.2 g,得率为24%,总黄酮含量为47.8%。2.以实验室自主研发二维制备色谱-制备色谱工厂(PCP)为手段,通过色谱分离专家系统软件XTool预测分离条件,建立以C18为分离、富集填料,甲醇/水、乙腈/水为一维、二维分离流动相,水为富集稀释液,梯度洗脱流速和稀释富集液的流速均为21mL/min,上样量300 mg,富集次数3次的二维色谱分离制备甘草黄酮的方法,其分离过程具有良好的重现性。3.应用建立方法进行PCP分离制备,对得到的部位进行检测分析,最终得到9个单体化合物。通过核磁共振分析鉴定单体化合物结构,分别得到以下纯化合物1:甘草苷(12mg)、2:甘草素(30 mg)、3:芒柄花黄素(10 mg)、4:刺甘草查尔酮(12 mg)、5:7,4’-二羟基黄酮(25 mg)、6:4’-O-[β-D-apio-D-furanosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]liquiritigenin(22 mg)、7:异甘草素(15 mg)、8:甘草酚(10 mg)、9:甘草香豆素(15 mg)。