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目的通过构建TGIF(TG-interacting factor,TGIF)稳定低表达的非小细胞肺癌细胞株(A549),观察沉默TGIF对A549细胞周期分布及Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探讨TGIF调控细胞周期的分子机制及对非小细胞肺癌细胞致瘤性的影响,为肺癌的治疗提供新的作用靶点。方法1.采用靶向TGIF的慢病毒颗粒和无效干扰对照慢病毒颗粒分别感染A549细胞,构建TGIF稳定低表达的细胞株(A549-shTGIF)和无效干扰对照细胞株(A549-shcon),通过蛋白免疫印迹(Western blots)检测TGIF蛋白表达水平,鉴定TGIF稳定低表达的A549细胞株是否构建成功。2.利用CASY细胞计数分析仪分析接种细胞24小时、48小时、72小时、96小时后,A549-shTGIF和A549-shcon细胞增殖的差异。3.通过体外软琼脂克隆形成实验和体内裸鼠致瘤实验,分析TGIF稳定低表达细胞与无效干扰对照细胞致瘤性的差异。4.利用流式细胞仪分析TGIF稳定低表达组与无效干扰对照组细胞周期分布的差异。5.运用Western blots分析沉默TGIF对A549细胞的细胞周期相关蛋白及其它肿瘤发生相关蛋白表达的影响。结果1.蛋白免疫印迹结果显示,与无效干扰对照组A549-shcon细胞相比,A549-shTGIF细胞的TGIF蛋白表达水平明显降低,说明TGIF稳定低表达的A549细胞株构建成功。2.细胞增殖实验结果显示,与A549-shcon细胞相比,A549-shTGIF细胞生长从48小时开始明显减慢,两组细胞增殖差异具有统计学意义(P<0.05)。3.体外软琼脂克隆形成实验结果显示,与A549-shcon细胞(58.4±4.0)相比,接种相同数量的A549-shTGIF细胞的克隆形成数(37.3±2.6)明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。体内裸鼠致瘤实验中,裸鼠接种细胞21天后,处死、剥离移植瘤块、称重并计算两组细胞形成移植瘤的平均重量。结果显示,接种A549-shcon细胞组的五只裸鼠皮下形成移植瘤的平均重量为0.5365±0.1874g,而接种A549-shTGIF细胞组的五只裸鼠皮下形成移植瘤的平均重量为0.2084±0.0804g,移植瘤生长显著减慢,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.流式细胞分析仪检测细胞周期分布显示,与对照组A549-shcon细胞(50.4±4.8%)相比,A549-shTGIF细胞组的G1期细胞所占比率(63.0±4.9%)显著增加(P<0.05),而S期细胞所占比率显著降低,分别为39.9±4.2%和29.7±4.5%,两组细胞在G1期和S期的细胞所占比率的差异均具有统计学意义(P<0.05)。5.蛋白免疫印迹结果显示,与对照组A549-shcon细胞相比,A549-shTGIF细胞的CDK4、cyclin D1以及phospho-Rb的蛋白表达水平明显降低,而p21的蛋白表达水平升高。另外,沉默TGIF基因后,A549-shTGIF细胞β-Catenin蛋白表达水平也明显降低。结论1.沉默TGIF抑制非小细胞肺癌细胞A549的增殖,并通过降低细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1、phospho-Rb的表达以及增加p21蛋白的表达,阻滞A549细胞的细胞周期于G1期。2.沉默TGIF抑制了非小细胞肺癌细胞A549的体外克隆形成能力,并抑制裸鼠体内移植瘤的形成,即沉默TGIF基因后A549细胞的致瘤性减弱。3.TGIF可能通过调节Wnt/β-Catenin信号通路影响非小细胞肺癌的发生和发展。