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目的: 研究GEN1干扰对乳腺癌SKBR3和MCF-7细胞化疗敏感性的影响，并探讨GEN1干扰在不同乳腺癌细胞中带来不同效应的相关机制。 方法: 通过抽提获得大量高纯度shRNA干扰质粒和阴性对照质粒，经实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测干扰效果，筛选最佳干扰质粒。利用最佳干扰质粒干扰乳腺癌SKBR3和MCF-7细胞中GEN1的表达;RT-PCR和Western blot检测干扰效果;用新型四唑单钠盐试剂盒(CCK-8)检测不同5-氟尿嘧啶(5-FU)浓度及IC50浓度下实验组和对照组细胞存活率;用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测5-FU作用下实验组和对照组细胞凋亡水平变化，研究GEN1干扰对乳腺癌SKBR3和MCF-7细胞化疗敏感性的影响。将Mus81高表达的MCF-7细胞进行GEN1和Mus81同时干扰，CCK-8细胞存活率实验检测实验组和对照组细胞存活率的变化;用低浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)处理sh-Mus81单干扰组和阴性对照组MCF-7细胞96 h，实时荧光定量PCR和Western blot检测MCF-7细胞中GEN1和Mus81表达水平变化;用低浓度5-FU处理正常SKBR3和MCF-7细胞96 h，Westernblot检测处理前后细胞中GEN1表达水平变化，探讨GEN1干扰在不同乳腺癌中带来不同效应的相关机制。 结果: 1.抽提的shRNA干扰质粒及阴性对照质粒经测定后浓度和纯度均达到要求，可以进行后续实验。RT-PCR结果表明:3号GEN1和2号Mus81干扰质粒干扰效果最佳。 2.利用最佳干扰质粒干扰乳腺癌SKBR3和MCF-7细胞中GEN1的表达后，RT-PCR和Western blot证明GEN1干扰效果良好;CCK-8细胞存活率实验表明:实验组SKBR3细胞存活率较对照组明显降低(P＜0.05）;实验组MCF-7细胞存活率较对照组无明显变化(P＞0.05); AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡实验显示:实验组SKBR3细胞凋亡水平较对照组明显增高(P＜0.05）;实验组MCF-7细胞凋亡水平较对照组无明显变化(P＞0.05）。以上结果表明，GEN1干扰可以显著提高SKBR3对5-FU的化疗敏感性，但对MCF-7对5-FU的化疗敏感性无明显影响，相关机制有待于进一步研究。 3.同时干扰GEN1和Mus81后，MCF-7对5-FU的化疗敏感性明显增强(P＜0.05);在低浓度5-FU持续作用下，sh-Mus81组MCF-7细胞中GEN1表达水平明显提高(P＜0.05）;在低浓度5-FU持续作用下，SKBR3细胞中GEN1水平明显提高(P＜0.05)，而MCF-7细胞中GEN1水平未见明显变化(P＞0.05)。以上结果表明，GEN1干扰对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响，同Mus81的表达水平密切相关。在Mus81高表达时，GEN1干扰对药敏没有明显影响;当Mus81表达降低时，干扰GEN1可以明显提高乳腺癌对5-FU的化疗敏感性。 结论: GEN1干扰可以明显增强SKBR3细胞对5-FU的化疗敏感性，但对MCF-7细胞的化疗敏感性无显著影响，这种差异是由于两株细胞间Mus81的表达水平差异引起的。在Mus81高表达时，干扰GEN1对药敏没有明显影响;当Mus81表达降低时，干扰GEN1可以明显提高乳腺癌对5-FU的化疗敏感性。