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第一部分骨肉瘤中医证型分布规律目的探讨骨肉瘤(osteosarcoma,OS)患者的中医证型分布规律,为临床辨证论治提供依据。材料和方法制定中医症候调查问卷,收集30例骨肉瘤患者的中医四诊资料,使用SPSS 22.0Ward系统聚类进行统计分析。结果骨肉瘤患者男女比例为3:2;平均年龄19.8岁,常见于儿童和青壮年;骨肉瘤主要有气滞血瘀证、肾虚精亏证、痰热互结证和脾肾阳虚证4种证型,证型与性别和年龄相关。气滞血瘀证骨肉瘤患者倾向于男性发病而痰热互结证骨肉瘤患者倾向于女性发病,气滞血瘀证骨肉瘤患者发病年龄小于脾肾阳虚证患者。结论骨肉瘤主要有气滞血瘀证、肾虚精亏证、痰热互结证和脾肾阳虚证4种证型,证型与性别和年龄相关。气滞血瘀证骨肉瘤患者倾向于男性发病而痰热互结证骨肉瘤患者倾向于女性发病,气滞血瘀证骨肉瘤患者发病年龄小于脾肾阳虚证患者。第二部分大蒜素调控GRP78/CRT抑制人骨肉瘤细胞生长的研究目的二烯丙基三硫醚,俗称为大蒜素(diallyl trisulfide,DATS)是一种从大蒜中分离出来的天然有机硫化合物,具有良好的抗癌活性。有许多研究指出,大蒜素可以下调葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和上调钙网蛋白(calreticulin,CRT)的表达,这与各种类型的人类癌症的预后不良和耐药性有关。然而,大蒜素对于人类骨肉瘤细胞是否具有同样的作用,目前尚不清楚。本研究试图阐明在人类骨肉瘤Saos-2细胞中大蒜素作用的潜在分子机制。材料和方法使用倒置相差显微镜和免疫荧光染色法(immunofluorescent staining)观察人骨肉瘤Saos-2细胞在不同浓度的大蒜素(0、25、50和100μM)中培养24 h,或在同一浓度的大蒜素(50μM)中培养四个时间段(24、48、72和96 h)后的形态变化。我们使用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)和免疫印迹法(western blot,WB)检测人骨肉瘤Saos-2细胞中GRP78或CRT mRNA和蛋白的表达水平。在人骨肉瘤Saos-2细胞中利用小干扰RNA(small-interfering RNA)抑制GRP78或CRT的表达,然后我们使用MTT法检测大蒜素对人骨肉瘤Saos-2细胞的抗增殖作用。结果由于大蒜素作用浓度和时间的增加,GRP78荧光强度、mR NA和蛋白的表达显著下调(P<0.05),CRT荧光强度、mR NA和蛋白的表达显著上调(P<0.05)。此外,GRP78或CRT沉默与细胞增殖之间存在显著的相关性(P<0.05)。结论大蒜素通过下调GRP78和上调CRT的表达,抑制了人骨肉瘤Saos-2细胞的生长。