河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种海洋生物毒素,分布广泛,不仅存在于河豚鱼中,其他一些海洋动物体内也有。TTX分子式为C11H17N3O8,相对分子质量319.28,是一种强神经毒。它通过对钠离子通道的阻断作用而抑制神经冲动的传导,使感觉神经麻痹,四肢瘫痪,呼吸困难,最后因呼吸抑制而死亡。TTX对人的致死剂量为6～7μg/kg,小鼠腹腔注射的LD50为8μg/kg。TTX中毒事件时有发生,且其作为潜在的生物战剂,对公共安全造成很大的威胁。因此,建立快速、准确、简便的检测方法,对TTX中毒的诊断和公共安全的防范有重要的意义。本实验利用甲醛法将河豚毒素与牛血清白蛋白和匙孔血蓝蛋白进行偶联,成功制备了人工检测抗原和免疫抗原。采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法,免疫Balb/C小鼠。将免疫后血清效价达到1:4000以上的Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合、筛选和克隆,共获得能稳定分泌抗河豚毒素的单克隆抗体杂交瘤细胞3株,分别命名为5B7、5B9、6B9,其中5B7的亚类为IgG1,其余的为IgG2a。对单抗的效价、亲和力等分析,选择单抗5B7用于建立河豚毒素间接竞争ELISA检测方法,检测条件优化后,建立了标准曲线,其标准曲线回归方程为y=-0.2028x+2.568,相关系数为R2=0.9762,检测范围为3.16～1000ng/mL,最低检测限为3.16ng/mL。河豚毒素单克隆抗体的制备为河豚毒素检测试剂盒和试纸条的研制奠定了基础。