论文部分内容阅读
淫羊藿(Epimedium brevicornu Maxim)属于小檗科淫羊藿属植物,主要能够治疗阳萎早泄,腰痛腿酸,四肢麻痹,失眠多忘等作用。淫羊藿中的主要活性成分是黄酮类成分,这类成分对免疫系统、骨骼系统、心血管系统、生殖系统、神经内分泌系统等具有显著的药理作用。淫羊藿在炮制的过程中,其黄酮类成分的含量会发生改变,其中淫羊藿苷(Icariin)的含量发生了显著的提升,这是由于黄酮类成分在受热之后结构发生了变化而导致。Icariin作为淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)中含量较高的一种黄酮苷,具有改善心脑血管、加强性腺、增强机体免疫等功能。我们通过建立小鼠和HEK293细胞的顺铂(cisplatin)诱导肾毒性损伤的模型,从肾功能指标、炎症指标、氧化应激指标、细胞凋亡的水平等方面,深入探讨了TFE和ICA的肾保护作用,并初步阐明了其在肾保护方面的分子机制。1、TFE对cisplatin诱导小鼠肾损伤的保护作用。将小鼠随机分为4组,每组8只,TFE(300和600mg·kg-1)+cisplatin组分别灌胃给予TFE 300mg·kg-1和600 mg·kg-1,空白组(Normal)和模型组(cisplatin)给予同样剂量的生理盐水。第7天给药1h后,cisplatin组和TFE(300和600mg·kg-1)+cisplatin组一次性腹腔注射cisplatin20 mg·kg-1以建立cisplatin肾损伤模型。小鼠眼眶取血,颈椎脱臼处死后,取血清和各器官组织,分别用于各项指标的检测和组织病理学染色分析。结果表明:TFE能够有效的降低肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)水平、提高谷胱甘肽转移酶(GSH)水平,此外TFE还能抑制肾细胞凋亡以及炎性浸润,通过抑制炎性因子Nrf2的表达来降低肾组织炎症,减少肾组织受到的损伤。2、淫羊藿在经羊脂油炮制前后,主要黄酮的含量变化。精密称取淫羊藿600g,平均分成12份,每份50g并且揉碎,根据《中国药典》规定的比例(物料比5:1),其中6份淫羊藿叶拌入10g羊脂油进行炒制,温度90℃,每份炒制10分钟,将淫羊藿叶炒至翠绿为止。其余6份淫羊藿叶直接进行淫羊藿总黄酮的提取。结果表明,在经过羊脂油文火炒制之后,其中四种属于黄酮类成分的物质朝藿定A(Epimedin A)、朝藿定B(Epimedin B)、朝藿定C(Epimedin C)以及ICA均发生不同程度的含量变化,其中朝藿定A下降了12%16%、朝藿定B下降了13%15%、朝藿定C下降了25%29%,ICA的含量升高,升高了40%52%。这说明淫羊藿在炮制之后,多糖苷黄酮类成分向次级糖苷黄酮类成分发生转变,这种转变可能是淫羊藿经过炮制之后,药理活性得到提升的原因之一。3、通过建立HEK293细胞损伤模型,观察ICA对cisplatin诱导的肾毒性的保护作用及可能的分子机制。首先,利用MTT法测定细胞活力,检测细胞中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量来评价其氧化应激水平,用Hoechst33258染色法、western blot探讨HEK293细胞的凋亡和其炎症信号通路相关蛋白的表达。结果表明:ICA能够有效的降低HEK293细胞中MDA的水平,抑制GSH的降低,并且能够调控促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2以及caspase-3/-9的表达水平,从而拮抗cisplatin诱导的HEK293细胞凋亡。同时,ICA能够降低炎症反应因子iNOS、NF-κB、TNF-α和IL-1β等蛋白的表达,从而抑制cisplatin诱导的HEK293细胞炎症反应。综上所述,本研究结果清晰地表明,TFE及其主要的黄酮成分ICA能够至少部分通过抑制炎症、缓解氧化应激损以及抗凋亡作用来拮抗cisplatin所引起的肾毒性,从而起到肾保护的作用。