论文部分内容阅读
目的： 研究药物雷帕霉素作用于非小细胞肺癌LK2细胞后microRNA表达的变化。 方法： 于培养瓶中培养非小细胞肺癌LK2细胞，加入终浓度为1umol/L的雷帕霉素溶液，采用加入等量的RPMI-1640培养基作为阴性对照，在培养温箱中过夜培养48小时之后，在培养瓶内加入1ml试剂Trizol，并使其充分接触细胞，从肺癌LK2细胞中提取RNA后，首先制备cDNA文库，将cDNA文库上机测序。采用了Illumina HiSeqTM 2500 microRNA测序方法进行microRNA测序，检测雷帕霉素作用于非小细胞肺癌LK2细胞后其中的microRNA的表达变化，并将其中表达有显著差异改变的microRNA进行靶基因预测，将与细胞增殖和凋亡相关的基因筛选出来进行靶基因预测。 结果： 与对照组相比，Illumina HiSeqTM 2500 miRNA测序显示，雷帕霉素作用于非小细胞肺癌LK2细胞后microRNA的表达有变化。实验中我们能够发现有9个microRNAs表达具有高显著差异，其中miR-320c，miR-1283，miR-29b-3p，miR-181c-5p，miR-24-3p，miR-26a-5p的表达显著增强。而miR-320b，miR-19b-3p，miR-181c-6p表达明显降低。通过预测了上述microRNA的与细胞增殖及凋亡相关靶基因，得到例如有PAX3，HMGB2等靶基因。 结论： 雷帕霉素作用于非小细胞肺癌LK2细胞后，可以诱导多个microRNA的表达改变，可以加强部分microRNAs的表达、也可以降低多个microRNAs的表达。提示microRNA可能参与了雷帕霉素抑制非小细胞肺癌LK2细胞的作用机制过程。