青海云杉(Picea crassifolia kom.)是我国特有树种,在西北地区分布广阔。历史上天然林遭受过强度破坏,有的遗传资源已经丢失,要对现有天然群体进行科学保护和合理利用,必须首先弄清其种内遗传多样性和遗传分化,为种质资源保存和该树种的遗传改良提供理论依据和基础资料。根据祁连山青海云杉天然群体的资源分布和实地调查结果,在祁连山分布区内选取了10个天然群体,通过ISSR分子标记技术对青海云杉天然群体的遗传多样性进行了研究。研究结果如下:1.青海云杉ISSR-PCR反应体系的建立以青海云杉基因组DNA为材料,对影响其PCR扩增结果的各个因素(Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、引物、退火温度)进行筛选和优化,最终确定适应于青海云杉ISSR-PCR反应的最佳反应体系。在20μL反应体系中包含1μL 10×buffer,1.5 mmo1/L的Mg2+,0.2mmo1/L的dNTPs,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA40ng,引物0.6μmol/L。PCR扩增程序为94℃预变性4min,94℃变性45s,48-58℃退火(退火温度随引物而定)1min, 72℃延伸2min, 40个循环, 72℃延伸10min。2.青海云杉天然群体遗传多样性分析应用ISSR分子标记技术对10个群体共169个个体进行了遗传多样性分析。从50条引物中筛选出10条引物。10条ISSR引物共扩增到120个位点,其中83个是多态性位点,总的多态性位点百分率(PPL)为69.17%。Nei’s基因多样性指数(He)为0.2128,Shannom多态性信息指数(I)为0.3219。10个不同群体的遗传多样性水平差异不大。群体多态性位点百分率在36.67%-59.17%之间,Nei’s基因多样性指数为0.1263-0.1863,Shannom多态性信息指数为0.1915-0.2823。10个群体间的遗传分化系数Gst为0.2897,说明群体间存在一定程度的遗传分化,群体间基因流Nm为0.6130。3.青海云杉天然群体聚类分析根据Nei’s遗传距离进行了UPGMA聚类分析的结果为,TZ1和TZ2群体聚为一类,SN1、SN2和SN3群体聚为一类,DT1和DT2群体聚为一类,前三类再与ML、MY群体聚在一起,最后将SD群体单独归为一类,与其地理分布基本吻合。