马铃薯晚疫病已超过小麦锈病及水稻稻瘟病,成为目前国际第一作物病害。致病疫霉Pi GK5蛋白属于GPCR-PIPKs（GKs）蛋白家族。研究显示,该蛋白在致病疫霉有性生殖、无性生殖及致病性方面均起重要作用。然而,关于致病疫霉Pi GK5蛋白的结构研究目前尚未见报道。由于跨膜蛋白在原核系统表达时通常以不具有生物活性的包涵体形式表达。因此,本研究分别对Pi GK5蛋白的胞外端、完整的胞内端及胞内端的三个删减突变体（胞内端-H8-LRx GI-PIPK蛋白、胞内端-LRx GI-PIPK蛋白和胞内端-PIPK蛋白）进行了原核表达、纯化与结晶。首先,PCR扩增Pi GK5蛋白的胞外端、完整的胞内端及胞内端的三个删减突变体c DNA编码区,分别将扩增片段克隆入p ET30和p TEV原核表达载体,然后,将各蛋白的原核表达载体分别转化大肠杆菌并进行诱导表达,之后,提取蛋白,并通过镍柱分离纯化、蛋白纯化系统纯化目的蛋白,最后,将纯化的蛋白进行晶体初筛。结果显示,Pi GK5-胞外端-His和胞内端删减突变体PIPK-His蛋白主要以包涵体的形成存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在于上清中。Pi GK5-胞内端-His及其删减突变体H8-LRx GI-PIPK-His、LRx GI-PIPK-His蛋白仅以包涵体的形式存在于沉淀中。Pi GK5-胞外端-MBP-His蛋白在大肠杆菌中仅以可溶性蛋白的形式表达,且蛋白表达量较多,但蛋白少量降解。Pi GK5-胞内端-MBP-His蛋白及其删减突变体LRx GI-MBP-His蛋白、PIPK-MBP-His蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在于上清中,且Pi GK5-胞内端-MBP-His蛋白几乎全部降解。而胞内端删减突变体H8-LRx GI-PIPK-MBP-His蛋白在大肠杆菌中则仅以包涵体的形式存在于沉淀中。说明MBP标签对Pi GK5蛋白胞外端具有较明显的促溶作用。菌体破碎时加5%及洗脱蛋白时加1%的表面活性剂可有效促进Pi GK5-胞外端-His和胞内端PIPK-His蛋白的可溶性。在12.0mg/m L浓度下,Pi GK5-胞外端-MBP-His蛋白可以形成少量较规则的菱形晶体,在8.5mg/m L浓度下,胞内端-PIPK-His蛋白可形成较多规则的菱形晶体。该工作的完成为研究致病疫霉Pi GK5蛋白的结构奠定了基础,对深入全面揭示该蛋白的功能及进一步研发病害有效防治的Pi GK5蛋白靶向药物具有比较重要的意义。