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本文以驱虫斑鸠菊成熟果实为原料,采用超声辅助提取法、微波辅助提取法和超临界CO2萃取法提取驱虫斑鸠菊中的紫铆素。结合单因素实验和响应面法优化实验得出三种提取方法的最佳工艺参数。分析比较了三种提取工艺的优缺点。考察了紫铆素提取液与补骨脂素提取液对人黑素瘤细胞A375酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。
首先,采用超声辅助提取法提取驱虫斑鸠菊中的紫铆素。对超声提取过程中影响提取率的因素进行单因素实验和中心组合实验,得出最佳的超声辅助提取工艺:驱虫斑鸠菊果实粉末100-120目,提取溶剂64%乙醇,液固比12.7 mL/g,超声提取时间46min,最佳工艺条件下紫铆素提取率的预测值为0.391 mg/g,实际值为0.384 mg/g。采用Design-Expert8.0.6软件拟合实验数据,建立了超声辅助提取驱虫斑鸠菊中紫铆素的数学模型。实验结果还表明超声辅助提取法的实验效果优于常规溶有机溶剂提取法。
其次,采用微波辅助提取法提取驱虫斑鸠菊中的紫铆素。对微波提取过程中影响提取率的因素进行单因素实验和中心组合实验,得出最佳的微波辅助提取工艺:驱虫斑鸠菊果实粉末100-120目,破壁助剂69%乙醇,破壁助剂用量12 mL,微波辐射时间40 s,微波功率336W,回流提取温度69℃,回流提取时间59 min,液固比14 mL/g,最佳工艺条件下紫铆素提取率的预测值为0.401 mg/g,实际值为0.405 mg/g。采用Design-Expert8.0.6软件拟合实验数据,建立了微波辅助提取驱虫斑鸠菊中紫铆素的数学模型。实验结果还表明微波辅助提取法的实验效果优于常规溶有机溶剂提取法。
再次,采用超临界CO2萃取法提取驱虫斑鸠菊中的紫铆素。对超临界CO2萃取过程中影响提取率的因素进行单因素实验和中心组合实验,得出最佳的超临界CO2萃取工艺:驱虫斑鸠菊果实粉末100-120目,夹带剂80%乙醇,夹带剂用量20 mL,静态浸取时间1.5 h,动态浸取时间1.5 h,萃取温度46℃,萃取压力30MPa,CO2流量11 g/min,最佳工艺条件下紫铆素提取率的预测值为0.281 mg/g,实际值为0.286 mg/g。采用Design-Expert8.0.6软件拟合实验数据,建立了超临界CO2萃取驱虫斑鸠菊中紫铆素的数学模型。实验结果还表明超临界CO2萃取法的实验效果优于常规溶有机溶剂提取法。
最后,从紫铆素提取率、提取液纯度、工艺操作可行性及其对环境的影响等方面,对超声辅助提取工艺、微波辅助提取工艺、超临界CO2萃取工艺进行分析和比较。综合考虑得出,微波辅助提取工艺更优于其它两种工艺,更适合工业化生产。
另外,本文采用酶学法研究紫铆素提取液与补骨脂素提取液对人恶性黑色素瘤细胞A375酪氨酸酶活性的影响,采用四甲基噻唑氮蓝(MTT)法结合光镜测定提取液对细胞形态、细胞增殖的影响。实验结果表明:紫铆素提取液与补骨脂素提取液联合作用于人恶性黑素瘤细胞A375时,有利于增强酪氨酸酶活性,促进黑色素合成,为驱虫斑鸠菊与补骨脂联合应用于治疗白癜风的可行性提供了实验依据。