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目的:
本研究观察在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)模型中,检测小鼠活化T细胞核因子Cl(NFATcl)及血脂表达水平的变化,并探讨CD137-CD137L相互作用对ApoE-/-小鼠NFATcl表达的影响及相关机制。
方法:
采用ApoE-/-鼠颈动脉硅胶圈植入法快速制作AS模型,苏木精-伊红(HE)染色,用于病理图像形态学分析。免疫组织化学法分析颈动脉AS斑块中NFATc1表达,RT-PCR和WesternBlot及流式细胞术方法分别检测小鼠脾脏淋巴细胞中NFATc1蛋白和mRNA的表达。
结果:
(1)与正常对照组相比,干预组小鼠血清TG、LDL-C、TC显著升高,HDL-C则显著降低。
(2)正常对照组血管内膜没有明显脂质、胆固醇及粥样斑块形成,血管内膜平整光滑,管壁均匀呈半透明状。术后ApoE-/-模型鼠血管内膜可见胆固醇结晶,有明显脂质及斑块形成,内含大量泡沫细胞,弹力板变性甚至断裂,而术后给予anti-CD137刺激剂后斑块更显著,术后给予anti-CD137L抑制剂后斑块较正常对照组减少。
(3)正常对照组颈动脉内NFATc1不表达,手术组ApoE-/-小鼠颈动脉斑块可见NFATc1表达,而术后体内给予anti-CD137刺激CD137-CD137L轴后,免疫组化显示ApoE-/-小鼠颈动脉AS斑块中NFATc1表达明显增强,同时应用anti-CD137L抑制该轴后,ApoE-/-小鼠颈动脉AS斑块中NFATc1表达显著减弱。
(4)体内腹腔注射anti-CD137特异性刺激CD137-CD137L轴后,脾脏淋巴细胞中NFATcl表达增加;而腹腔注射anti-CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴后,脾脏淋巴细胞中NFATc1表达减少。
(5)体外培养的脾脏淋巴细胞中anti-CD137刺激CD137-CD137L轴后,淋巴细胞NFATc1mRNA和蛋白表达明显上调,刺激浓度以20μg/mL时作用最强,刺激时间24h最佳。Anti-CD137L特异性抑制CD137-CD137L轴能明显降低NFATc1mRNA及蛋白表达,浓度以20μg/mL时抑制作用最强,抑制时间24h最佳。
结论:
(1)CD137-CD137L在动脉粥样硬化的形成、发展中发挥着重要作用。
(2)CD137-CD137L相互作用能调控ApoE-/-小鼠NFATc1的表达。NFATc1可能是受CD137-CD137L调控的影响动脉粥样斑块进展的下游分子。