慢病毒载体源于HIV-1前病毒(HIV-1 provirus)基因组。其宿主范围广,可以感染分裂和非分裂细胞；整合效率高,并可以使外源基因稳定长期地表达。慢病毒载体已经成功地应用于多种转基因动物的生产。本试验使用三质粒系统的慢病毒载体,它属于自我失活性载体,并含有WPRE等调控元件。　　 Fat-1基因来源于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),其表达产物为一种ω-3不饱和脂肪酸脱氢酶。可以将ω-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)转化成ω-3PUFAs,提高了动物体内ω-3 PUFAs的含量。ω-3 PUFAs对人类的健康有重要作用,可以提高机体免疫力,预防多种心血管疾病等。本试验构建了由IRES介导的可同时表达Fat—1基因和标记基因EGFP的慢病毒载体。为后续转基因动物的生产奠定了基础。　　 以往的慢病毒包装方法效率较低,且结果不稳定。为提高慢病毒包装效率,本试验研究比较了贴壁和悬浮293T细胞的磷酸钙法慢病毒包装效果。结果表明,利用悬浮细胞获得的病毒滴度较贴壁细胞高近3.5倍,同时,转染悬浮细胞的进行慢病毒包装具有很好的重复性,且悬浮细胞直接用于病毒包装,节省了至少24小时细胞培养时间。因此,本试验建立了悬浮细胞慢病毒高效包装技术。　　 本试验研究了慢病毒与精子共孵育后体外受精制备转基因动物的方法。在小鼠和牛上重复多次均没有得到阳性胚胎。为了研究受精过程对慢病毒感染胚胎的影响,本试验采用卵周隙显微注射的方法,用低滴度的病毒(106 TU/ml)分别感染小鼠受精卵和卵母细胞。受精卵组的阳性率为8.3％,卵母细胞组没有得到阳性胚胎。此结果表明受精过程并没有明显提高慢病毒感染小鼠胚胎的效率。　　 为了研究慢病毒载体在制备转基因牛上的应用,本试验分别取卵母细胞、受精卵、2～4细胞胚胎、8～16细胞胚胎、16细胞以上的桑葚胚,采用滴度为108 TU/ml的慢病毒进行透明带下显微注射。结果:受精卵组和2～4细胞胚胎组都没有得到阳性胚胎；卵母细胞组阳性率为33.3％；8～16细胞胚胎组阳性率为2.2％；桑葚胚组阳性率为71.4％。结果表明卵母细胞透明带下显微注射慢病毒来生产转基因牛是一种效率很高的方法。牛胚胎发育到8～16细胞后,随着基因组转录活性的增强,慢病毒感染效率越来越高。