亚硫酸盐分泌量提高的啤酒酵母菌株的构建

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二氧化硫是啤酒中的抗氧化物质,也是维持啤酒风味稳定性的关键物质。本文以啤酒酵母M8为研究对象,对其发酵性能,抗氧化性能以及亚硫酸盐代谢过程进行了研究;以提高啤酒酵母M8二氧化硫生成量为目标,对不同启动子长度的亚硫酸盐转运蛋白编码基因SSU1-J和SSU1-2在实验室酿酒酵母YS58和啤酒酵母M8中的表达进行了研究,并对重组菌株的发酵性能和抗氧化性能进行了初步研究。   本实验室通过紫外诱变方法,已筛选到一株低产硫化氢,适量高产二氧化硫的啤酒酵母M8。啤酒发酵实验结果表明,啤酒酵母M8的发酵性能和遗传稳定性良好;与原株S-5相比,啤酒酵母M8第20代菌株M8g-20发酵的啤酒的二氧化硫生成量比原株S-5提高了13.1%,DPPH自由基清除率提高了12.4%,TBA值降低了4.6%。啤酒酵母M8亚硫酸盐转化为硫化物的代谢能力比原株S-5有所降低。   通过PCR方法扩增出啤酒酵母M8带有782bp启动子的SSU1-J基因及带有542bp启动子的SSU1-2基因,将得到的SSU1-1和SSU1-2基因分别与酵母附加型载体YEp352相连接,构建得到重组表达载体pSU1和pSU2。通过电转化法将pSU1和pSU2载体分别转化实验室酿酒酵母YS58得到重组子。对筛选到的转化子进行二氧化硫生成量测定,其中pSU1-4转化子的二氧化硫生成量比YS58提高了40.2%,pSU2-3转化子的二氧化硫生成量比YS58提高了48.3%。选择表达水平较高的重组表达载体pSU2电转化啤酒酵母M8,对转化子进行二氧化硫和硫化氢生成量测定。啤酒酵母转化子Y2的二氧化硫生成量为38.84mg/L,比啤酒酵母M8提高了80.8%;硫化氢生成量为13.86μg/L,与啤酒酵母M8相差不大。   啤酒发酵实验结果表明,啤酒酵母转化子Y2的发酵性能良好,DPPH自由基清除率比啤酒酵母M8提高了38.2%,TBA值下降了14.9%,抗氧化能力有较大提高,啤酒风味稳定性得到改善。
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