目的:急性淋巴细胞白血病是儿童最常见的恶性肿瘤,尽管近些年患儿的缓解率明显升高,但治疗中的复发和耐药仍是目前存在的主要问题,因此对新药的探索从未停滞。硼替佐米是一种被广泛应用的新型抗肿瘤药,其可能的作用机制是通过抑制蛋白酶体活性而影响多条细胞信号转导通路进而引起细胞凋亡,研究证实其在白血病的治疗中前景广阔。自噬-溶酶体系统与泛素-蛋白酶体系统是真核细胞降解蛋白质的两种途径,二者相互依存,所以单独应用硼替佐米治疗肿瘤时其药效可能会受到自噬调节的影响。本课题通过应用硼替佐米抑制蛋白酶体活性,探究硼替佐米对Jurkat T淋巴细胞白血病细胞的作用,并应用自噬调节剂雷帕霉素激活自噬或3-甲基腺嘌呤抑制自噬,观察自噬在硼替佐米诱导的Jurkat细胞凋亡中的作用;此外还通过对急性淋巴细胞白血病患儿治疗前后的骨髓细胞中自噬相关蛋白表达的检测,观察化疗药物对骨髓细胞自噬水平的影响。方法:Jurkat细胞培养至对数生长期,单独应用硼替佐米或联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤或自噬激活剂雷帕霉素处理细胞24h;应用细胞增殖检测试剂盒检测Jurkat细胞存活率,结果应用GraphPad Prism 5.0进行分析;提取Jurkat细胞蛋白质并用BCA试剂盒测定蛋白质浓度后,用western blot方法检测自噬及凋亡相关蛋白,结果应用Quantity One软件进行分析;收集急性淋巴细胞白血病患儿治疗前后及免疫性血小板减少症患儿的骨髓涂片,应用免疫组织化学染色方法对骨髓细胞中自噬相关蛋白p62进行染色,之后应用显微镜对阳性细胞进行计数,并应用GraphPad Prism 5.0对观察结果进行统计学分析。结果:单独应用硼替佐米处理Jurkat细胞时,Jurkat细胞的存活率随硼替佐米浓度的升高而下降,自噬相关蛋白LC-3的表达水平随硼替佐米浓度的升高而提高;联合应用3-甲基腺嘌呤和硼替佐米时,Jurkat细胞的存活率较单独应用硼替佐米时下降,LC-3B的表达水平较单独应用硼替佐米时下降;联合应用雷帕霉素和硼替佐米时,Jurkat细胞的存活率较单独应用硼替佐米时下降,且下降幅度较联合应用3-甲基腺嘌呤和硼替佐米时更为显著,LC-3B的表达水平较单独应用硼替佐米时升高;急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞的自噬相关蛋白p62表达水平低于对照组(免疫性血小板减少症);化疗缓解后的骨髓细胞p62表达水平较化疗前明显升高,且高于对照组。结论:1.硼替佐米能够以剂量依赖的方式诱导Jurkat细胞凋亡并激活自噬;2.抑制或激活自噬均能增强硼替佐米诱导的Jurkat细胞的凋亡,激活自噬效果更为显著;3.急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞自噬水平提高,化疗可以降低自噬水平。