猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的研制

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猪圆环病毒2型(Porcine Circuvirus 2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)的主要病原。PCV2包含两个开放式阅读框ORF1和ORF2,其分别编码病毒复制酶相关蛋白(Rep)和病毒衣壳蛋白(Cap),其中Cap蛋白含有病毒主要抗原表位,可诱导猪体产生免疫保护作用。本研究利用GST Trap亲合层析柱将纯化的Cap蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术获得了一株单克隆抗体,主要内容包括:1本研究利用GST Trap亲合层析柱纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA方法筛选,获得1株能稳定分泌抗Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为5H7。亚型鉴定结果为IgGl型,轻链为K链。间接免疫荧光试验与Western-blotting分析结果表明,该株单克隆抗体可与PCV2毒株感染细胞产生特异性反应,而不能与PCV1毒株反应。体外培养连续传代至第20代,仍能稳定分泌抗PCV2抗体,ELISA抗体效价达1:5000以上,,腹水ELISA抗体效价1:409600。2本研究用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体5H7与这3株不同PCV2分离株进行间接免疫荧光试验,结果表明该株单抗可与PCV2不同分离毒株感染细胞产生特异性反应,而不能与PCV1毒株反应。从而为PCV2分离株的鉴定及Cap功能研究奠定了一定的基础。
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