本研究以河北藁城鸭梨为试材，研究了急速和缓慢两种降温方式对不同成熟度鸭梨脂氧合酶（LOX）活性、LOX同工酶、乙烯及呼吸生理代谢的影响，及与鸭梨果实褐变的关系。对LOX基因进行了3RACE克隆，同时对LOX基因表达量差异进行了半定量RT-PCR分析，探讨了贮藏期间LOX基因表达与鸭梨褐变之间的关系。通过研究，主要得到如下结果：　　1．不同成熟度鸭梨在采后同样时间LOX酶活性、褐变指数、呼吸强度和乙烯释放量顺序为：晚采鸭梨>早采鸭梨>中采鸭梨，急速降温处理的鸭梨LOX酶活性、褐变指数、呼吸强度和乙烯释放量高于同期缓慢降温果，缓慢降温抑制了LOX酶活性，从而延缓了膜脂过氧化作用对细胞膜的破坏，延缓了果实衰老，适时采收、缓慢降温可减少果心和种子膜脂过氧化以及果心褐变。三种采收成熟度鸭梨LOX酶活性高峰出现的时间与呼吸、乙烯高峰时间接近，说明LOX酶与果实的呼吸和乙烯代谢有一定的关系。鸭梨果实LOX酶活性变化趋势与果实褐变指数相一致，说明LOX酶与鸭梨褐变有密切的相关性。　　2.优化了适用于鸭梨组织的最佳非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件，并对鸭梨果皮、果肉中的LOX同工酶进行分析。最合适的提取缓冲液为0.1mol/LpH7.0的磷酸盐缓冲液，最适分离胶浓度为10％。鸭梨果肉、果皮中LOX同工酶谱带差异不是很大，鸭梨果皮果肉中LOX同工酶有9条带，果皮、果肉中有相同的三条主酶带。不同成熟度鸭梨果实LOX酶活性有一定的差异，不同的贮藏期LOX酶活性也不一样。根据染色条带的深浅，不同成熟度鸭梨中LOX酶活性：晚采果>早采果>中采果，急速降温果实>缓慢降温果实，不同的降温处理对晚采鸭梨果肉、果皮中LOX同工酶影响不大，这与LOX酶活性及褐变指数测得结果一致，进一步说明LOX酶与鸭梨褐变有一定的关系。鸭梨果皮中LOX酶活大于果肉，推测鸭梨果皮中F，H条带，果肉中的C，G条带与鸭梨褐变有一定的关系。　　3.采用Trizol法、热硼酸法、改良CTAB法提取鸭梨中的总RNA，改良CTAB法提取的鸭梨中总RNA质量最好。根据GeneBank中已登录的梨、杏、桃的LOX基因序列，设计特异引物，克隆得到了一段长为1250bp的cDNA片段。cDNA同源性分析表明：该序列与猕猴桃（Actini diadeliciosa）、葡萄（vitis vinifera）、碧桃（Prunus persica）、李属（Prunus armeniaca）、杨树（Populus trichocarpa）的序列同源性都在80％以上，说明克隆得到的该cDNA片段为脂氧合酶基因家族的一个成员。　　4．使用改良CTAB法提取不同降温方法处理的不同成熟度鸭梨中的总RNA。根据GenBank上登录的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计一对简并引物，利用半定量RT-PCR对急速和缓慢两种降温方法对不同成熟度鸭梨中LOX基因表达影响进行了半定量RT-PCR分析，结果表明，不同成熟度鸭梨LOX基因表达量呈现先缓慢上升，之后下降，在贮藏的末期基因表达量又上升。急速降温鸭梨LOX基因表达量大于缓慢降温果，这与酶活的变化与鸭梨褐变指数变化趋势一致，说明LOX基因与鸭梨褐变有着重要联系。