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目的:构建FUT2基因过表达慢病毒载体,并使用此载体转染胰腺癌PaCa-2细胞,构建FUT2基因过表达的PaCa-2细胞,初步探索FUT2基因过表达对胰腺癌PaCa-2细胞功能的影响,并为今后进一步研究FUT2的作用机制奠定基础。方法:(1)FUT2基因慢病毒载体的构建:PCR扩增FUT2基因,电泳鉴定正确后与慢病毒载体连接,将构建好的FUT2慢病毒载体进行转化并通过电泳和基因测序进行鉴定;使用正确的FUT2慢病毒载体和混合质粒共转染293T细胞,将产生的病毒颗粒过滤和浓缩,之后进行质检。(2)FUT2基因过表达胰腺癌PaCa-2细胞构建:使用先前构建的病毒颗粒感染胰腺癌PaCa-2细胞,使用药物筛选FUT2过表达胰腺癌PaCa-2细胞株;利用实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测慢病毒后胰腺癌PaCa-2细胞中FUT2基因在mRNA水平与蛋白水平上的表达变化。(3)功能试验:通过CCK-8细胞增殖实验、Trans-well侵袭实验、划痕试验、流式细胞凋亡实验检测FUT2基因过表达对胰腺癌PaCa-2细胞增殖、迁移、转移能力及凋亡情况的影响。结果:经电泳实验和基因测序鉴定证实FUT2慢病毒载体构建正确;使用该载体转染293T细胞,感染效率可达90%以上;Real-time PCR和Western Blot方法检测结果提示:慢病毒转染PaCa-2细胞后,FUT2基因可在细胞中稳定表达,与对照组相比慢病毒感染组FUT2基因在mRNA水平与蛋白水平上的表达量分别上调了 502倍和15;CCK-8细胞增殖实验提示:FUT2基因过表达使PaCa-2胰腺癌细胞增殖明显减缓,其差异有统计学意义(p<0.05);Trans-well侵袭实验结果显示:FUT2基因过表达可以显著减少PaCa-2细胞穿膜细胞数,其差异有统计学意义(p<0.05);划痕试验结果显示:慢病毒转染组24h迁移率明显低于对照组(p<0.05);凋亡实验结果显示:慢病毒转染组在72h后PaCa-2细胞凋亡率(8.86%)明显高于空细胞组(0.82%)和空病毒转染组(0.83%)(p<0.05)。结论:1.FUT2基因过表达可抑制PaCa-2胰腺癌细胞增殖能力;2.FUT2基因过表达可抑制PaCa-2胰腺癌细胞迁移能力;2.FUT2基因过表达可抑制PaCa-2胰腺癌细胞侵袭能力;5.FUT2基因过表达可促进PaCa-2细胞凋亡。目的:血清CA19-9水平与胰腺癌患者的复发和生存相关,但是临床中发现并非所有胰腺导管腺癌患者都会出现血清CA19-9升高,然而对于血清CA19-9正常型胰腺癌的临床特点和预后特征知之甚少。本研究旨在探讨CA19-9正常型胰腺癌临床病理、复发及预后特征,并分析该类型胰腺癌的最佳治疗模式。方法:将纳入的胰腺癌患者(N=522)分为CA19-9正常组(≤37U/ml)和CA19-9升高组(>37U/ml),比较两组的临床病理特征、生存率和复发模式。此外,我们还探讨了影响CA19-9正常型胰腺癌患者预后的危险因素,以及该类患者术后最佳的辅助治疗模式。结果:与CA19-9升高型胰腺癌相比,CA19-9正常型胰腺癌发生淋巴结转移、脉管瘤栓、胰腺内神经浸润、胰腺前被膜侵犯和周围组织/器官(远端胆管、十二指肠和脾动脉/静脉)浸润均较低(p<0.05)。此外,与CA19-9升高型胰腺癌相比,CA19-9正常型胰腺癌的总生存率(OS)较长;而且CA19-9正常型胰腺癌的局部复发率(35.35%vs 52.53%,p=0.004)、远处转移率(42.42%vs 60.6%,p=0.003)和混合复发率(5.05%vvs29.29%,p<0.000)显著低于CA19-9升高型;多因素分析结果提示淋巴结转移(HR=1.653,p=0.041)、肿瘤大小>3cm(HR=2.148,p=0.000)、脉管瘤栓(HR=3.623,p=0.000)和术后无辅助治疗(HR=2.395,p=0.001)是影响CA19-9正常型胰腺癌预后的独立危险因素。此外,手术切除联合术后化疗(HR=0.382,p=0.001)/同步放化疗(HR=0.404,p=0.002)是 CA19-9 正常型胰腺癌的最佳治疗模式。结论:1.与CA19-9升高型胰腺癌相比,CA19-9正常型胰腺癌具有侵袭能力低、复发率低、预后好的优势;2.淋巴结转移、肿瘤直径>3cm、脉管瘤栓和术后无辅助治疗是影响CA19-9正常型胰腺癌预后的独立危险因素;3.手术+术后辅助化疗/同步放化是CA19-9正常型胰腺癌的最佳的治疗模式,具有最长的生存时间,不建议术后行单纯辅助放疗;4.CA19-9正常型胰腺癌由于缺乏有效的肿瘤标志物,术后应加强随访频率,以减少随访期间复发的漏诊,特别是合并高危因素的患者目的:目前胰腺导管腺癌AJCC分期已经更新至第8版,提高了对胰腺导管腺癌的认识,但该分期的合理性仍须大量临床数据的支持。我们通过长期的临床随访资料来验证第8版AJCC胰腺导管腺癌分期系统,并对其不足提出修改和补充。方法:将2006-2015年期间在本院接收的胰腺癌病例中筛选627例患者作为研究对象。按照第8版AJCC胰腺导管腺癌分期及基于该分期的修改将研究对象重新分组,比较各亚组间的生存并重新排列得出改良版分期,并利用ROC曲线和C-指数对两种分期方法的预后判断效力进行比较。结果:Kaplan-Meier生存分析结果提示合并脉管瘤栓的患者OS明显低于无脉管瘤栓的患者(中位生存时间:28.8月vs20.8月,P<0.000)。多因素分析显示脉管瘤栓与OS(P=0.000)显著相关,提示脉管瘤栓是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素(HR=1.768,P=0.000)。因此我们将脉管瘤栓引入胰腺癌分期系统并得出改良版分期系统,通过C-指数分析(C-index=0.732)和ROC曲线(曲线下面积=0.729)对两种分期方法进行比较,结果提示与第8版AJCC分期相比,改良分期方法能更有效地评估胰腺癌的严重程度和预后。结论:1.本研究表明第8版胰腺癌AJCC分级系统有一定缺陷,对于ⅠB期,ⅡA期和ⅡB期的患者不能有效区分生存差异;2.脉管瘤栓是影响胰腺癌预后的独立危险因素,因此脉管瘤栓应作为胰腺癌分期的参考因素;·3.我们首次将脉管瘤栓引入胰腺癌分期并提出了改良分期系统,改良分期系统在评估胰腺癌预后方面较第8版胰腺癌AJCC分级系统更为准确。