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高度近视亦称病理性近视或变性近视，约占原发性近视的3％～6％。患者的视力严重下降，矫正视力多不理想，这极大的影响了患者的学习、工作和生活。人们对近视的研究已有200多年的历史，但其发病机制至今不明。形觉剥夺学说认为：一些在发育早期影响视网膜上正常成像的因素可导致眼轴过度增长，形成高度近视。自1977年首次建立形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia，FDM)动物模型以来，高度近视的基础研究取得了突破性进展，人们对其发生、发展有了进一步了解。目前已知视网膜上多种神经递质及生物活性物质参与了出生后眼球生长的调控，促进形觉剥夺性近视的形成。近年的研究表明，一氧化氮(nitric oxide，NO)作为一类新发现的神经递质参与了形觉剥夺性近视的形成，但其具体作用机制不详。有研究发现，鸡眼形觉剥夺时，视网膜-色素上皮-脉络膜中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性降低，形觉剥夺性近视形成过程中是否存在有氧自由基聚集，脂质过氧化的现象，目前尚不清楚。有资料显示，病理性近视眼视网膜中存在感光细胞凋亡的现象，形觉剥夺性近视形成过程中是否存在视网膜细胞凋亡的现象，尚未见相关报道。本研究拟建立新生鸡形觉剥夺性近视模型，应用化学比色法测定视网膜-色素上皮-脉络膜中一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)、SOD的活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量，应用HE染色观察视网膜和巩膜的形态学改变，采用TUNEL技术检测视网膜细胞凋亡的情况，从而探讨形觉剥夺性近视的发生机制，NO、氧自由基及细胞凋亡与形觉剥夺性近视形成的关系。 材料与方法郑州大学2003年硕士毕业论文一氧化氮、氧自由基及细胞凋亡一与形觉剥夺性近视1.生化方面的检测:选用健康雄性海兰雏鸡80只，随机分为4组，出生后第二天将右眼以半透明眼罩遮盖作为形觉遮盖眼，左眼为开放对照眼。分别于遮盖7、14、21、28天时去除眼罩，自然状态下检影验光，确定遮盖眼及对照眼的屈光状态，而后迅速断颈处死，摘出眼球，剪除眼球周围软组织，用游标卡尺测其眼轴长及赤道径。解剖显微镜下于冰台上剥离视网膜一色素上皮一脉络膜、匀浆、高速冷冻离心机离心20分钟(0一2℃，3500甲m)，上清液即为待测样本。化学比色法测定视网膜一色素上皮一脉络膜中NOS、SOD的活性及MDA的含量。2.形态学观察及TIJNEL染色:选用健康雄性海兰雏鸡加只，半透明眼罩遮盖右眼，遮盖眼于遮盖7天时去除眼罩，自然状态下检影验光，而后迅速断颈处死，摘出眼球，剪除眼球周围软组织，用游标卡尺测其眼轴长及赤道径。常规固定、脱水、透明、浸蜡、包埋，作spm厚石蜡切片。常规HE染色，于光学显微镜下观察视网膜及巩膜的形态学变化;采用Tl」NEL技术，检测视网膜细胞凋亡的情况。结果1.生化方面的检测:(1)眼罩遮盖使遮盖眼形成近视:遮盖眼负性屈光度、眼轴长及赤道径增长迅速，同一时间点遮盖眼与对照眼屈光度、眼轴长及赤道径相比差异有显著性(p<。.05)，随遮盖时间延长双眼间差异更显著。(2)i一05活性(U/m 9 prot)=遮盖7、14、21、28天时，遮盖眼视网膜一色素上皮一脉络膜中i一NOS活性分别为0.35士0.02、0.33士0.02、0.32士0.02、0.29士0.02，对照眼中分别为0.39士0.02、0.37士0.03、0.39士0.02、0.37士0.03;同一时间点与对照眼相比，遮盖眼视网膜-色素上皮一脉络膜中i一05活性降低，双眼相比差异有显著性争<0.05)，随着遮盖时间的延长，遮盖眼中i一NOS活性不断降低，双眼间的差异更显著。(3)总NOS活性:遮盖眼与对照眼视网膜一色素上皮一脉络膜中总NOS活性相比差异无显著性幼>0.05)。(4)MDA含量(nmol/mg prot):在遮盖7、14、21、28天时，遮盖眼视网膜一色素上皮一脉络膜中MDA含量分别为1 .52士0.29、1.64士0.21、1.97士0.22、1.93士0.27，对照眼中分别为1.30士0.22、1.26士0.27、1.37士0.28、1 .51士0.28，同一时间点，遮盖眼视网膜一色素上皮一脉络膜中MDA的含量均高于对照眼，双眼相比差异有显著性(尸<0.05)。(5)soD活性(NU/mg prot):在遮盖7、14、21、28天时，遮盖眼视网膜一色素上皮一脉络膜中SOD的活性分别为令郑州大学2003年硕士毕业论文一氧化氮、氧自由基及细胞凋亡与形觉剥夺性近视40.47士3.62、33.14士3.27、33.26士3.17、31.10士3.68，对照眼中分别为48.81士6.05、45.18士5.82、46.25士5.87、42.23士6.48，在同一时间点，遮盖眼视网膜一色素上皮一脉络膜中SOD活性均低于对照眼，双眼相比差异具有显著性(p<0.05)。2.形态学观察及Tl」NEL染色:(l)遮盖眼形成近视:遮盖眼与对照眼屈光度、眼轴长及赤道径差异有显著性(p<0.05)。(2) HE染色:遮盖眼视网膜较对照眼普遍变薄，尤以内核层、内丛状层、神经纤维层最为明显，且内核层胞核的层数较对照眼减少;遮盖眼后极部巩膜软骨层变厚，软骨细胞数增多，纤维层变薄。 (3) TUNEL染色:凋亡细胞的特征为细胞核中有紫蓝色颗粒，它主要分布于视网膜的感光细胞层、内核层、神经节细胞层。视网膜每油镜视野平均凋亡细胞数在对照