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目的:探讨五味子乙素对Ba P致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的预防作用,并初步研究其可能的作用机制。方法:1建立体外Ba P损伤模型及测定不同浓度五味子乙素的保护作用:实验分组:对照组、Ba P染毒组、Ba P染毒+不同剂量的五味子乙素(0.1、0.5、2μmol/L)组。用MTS法测定细胞存活率。2氧化系统物质的分析:测定相关氧化物质,活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化及一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS/NO)系统中一氧化氮(NO)、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)、总一氧化氮合酶(TNOS)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的含量变化。3抗氧化系统物质的分析:测定抗氧化相关酶,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量变化。4 DNA氧化损伤程度的评价:通过彗星实验(单细胞凝胶电泳)测定细胞DNA损伤程度;利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞外液中DNA氧化损伤标记物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的含量。5 DNA氧化损伤修复的评价:半定量PCR(RT-PCR)及实时定量PCR(q RT-PCR)技术分别检测碱基切除修复途径相关基因人X射线修复交差互补组1(XRCC1)、人多聚ADP核糖聚合酶(PARP1)、人8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)基因的表达水平,ELISA法检测XRCC1、PARP1蛋白表达量和免疫印迹法(westernblotting)检测人8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶OGG1蛋白表达量。结果:1五味子乙素对Ba P致HTR-8/SVneo细胞损伤的保护作用经MTS法检测。根据染毒强度和细胞存活率状况,选定染毒浓度为20μmol/l Ba P作用24小时,建立Ba P损伤模型,同时选定五味子乙素浓度为0.1、0.5、2μmol/l。研究发现:与Ba P组相比,不同剂量五味子乙素组能显著降低Ba P对HTR-8/SVneo细胞的杀伤作用,提高细胞的存活率,差异有统计学意义(P<0.05)。2五味子乙素对Ba P损伤模型中氧化物质的影响与对照组比较,Ba P组细胞ROS、LDH、MDA的表达量显著增加,细胞NOS/NO系统中TNOS、i NOS、e NOS活性增强,NO表达量增加(P<0.05)。而不同剂量的五味子乙素组与Ba P组相比,细胞ROS、LDH、MDA含量均有不同程度的减少,细胞NOS/NO系统中TNOS、i NOS、e NOS活性降低,NO含量减少(P<0.05)。3五味子乙素对Ba P损伤模型中抗氧化系统的影响与对照组比较,Ba P组细胞SOD、GSH-Px的活性下降(P<0.05),而不同剂量的五味子乙素组与Ba P组相比,细胞SOD、GSH-Px的活性显著提高(P<0.05)。4五味子已素对Ba P损伤模型中DNA损伤的影响与对照组比较,Ba P组细胞培养液中8-OHd G的表达量显著升高,同时彗星实验表明细胞DNA损伤程度显著增加,其O Live尾距、尾长及尾部DNA%含量增加,头部DNA%含量减少(P<0.05)。而五味子乙素提前干预后,明显抵抗了因Ba P诱导的8-OHd G含量的升高,同时DNA损伤程度也明显减轻,其O Live尾距、尾长、尾部DNA%显著低于Ba P组,而头部DNA%高于Ba P组(P<0.05)。5五味子乙素对Ba P损伤模型中DNA损伤修复的影响与对照组比较,Ba P组碱基切除修复途径相关因子XRCC1、PARP1、OGG1基因及蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。而不同剂量的五味子乙素组与Ba P组相比,XRCC1、PARP1、OGG1基因及蛋白的表达量显著提高(P<0.05)。结论:1 Ba P可引起细胞氧化—抗氧化系统失衡,诱发细胞的氧化应激,导致脂质过氧化水平升高以及抗氧化能力减弱。而五味子乙素可通过提高氧化酶SOD、GSH-Px的活性,减少自由基的生成量,降低NOS酶的活性,减少NO的含量,维持NOS/NO系统的平稳,纠正细胞氧化系统和抗氧化系统的失衡状态,从而预防Ba P对细胞的氧化损伤。2 Ba P可诱发细胞产生氧化应激反应造成DNA的氧化损伤。而五味子乙素可以通过作用于碱基切除修复途径,上调相关修复基因OGG1、XRCC1、PARP1的表达水平,提高DNA氧化损伤的修复能力,减少DNA的氧化损伤。因此,五味子乙素有望开发为一个高效的天然药物以实现优生、保护胚胎健康发育,为人类生殖健康提供一个天然的防护伞。