本实验旨在从知母中分离制备高纯度的菝葜皂苷元,并研究和探讨菝葜皂苷元的潜在的生物学活性,尤其是菝葜皂苷元在抗肿瘤方面的作用。 知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)作为一种常用中药,现在越来越受到国内外研究者的重视,具有不错的发展潜力和市场前景。菝葜皂苷元(sarsasapogenin)是知母中一种主要活性成分,具有清热解毒,止渴除烦,润肺滋肾,抗病毒,抗血小板聚集,降血糖,清除自由基等生理作用。可以用来主治现代医学中烦热消渴,热性病高烧,肺热咳嗽,结核病发热,糖尿病,大便干燥,老年性痴呆症及脑功能减退等症状。因此菝葜皂苷元具有广泛的应用前景。但是,目前关于菝葜皂苷元在抗肿瘤方面的研究报道甚少。 实验包括两个部分,第一部分为菝葜皂苷元的分离纯化。我们首先通过乙醇回流浸提,D101大孔树脂(蒸馏水、10%氢氧化钠溶液、30%的乙醇水溶液、90%的乙醇水溶液)梯度洗脱、10%盐酸酸解、活性炭脱色和甲醇重结晶等方法从中药知母中提取菝葜皂苷元晶体,然后利用红外、质谱、核磁共振和高效液相色谱等化学方法鉴定其结构和纯度。实验的第二部分为菝葜皂苷元生物学活性的研究。我们将分离纯化而得的菝葜皂苷元作用于肝癌细胞HepG2,通过电泳、MTT、流式细胞、荧光染色和电镜等方法研究菝葜皂苷元对肝癌细胞HepG2的凋亡影响。 本研究发明的菝葜皂苷元分离提纯的方法具有分离速度快、分离成本低、得率高、纯度高(纯度>98%)、晶体规则(白色针晶)、原料丰富易得等特点;在生物活性实验中,发现菝葜皂苷元能明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进细胞凋亡,并且凋亡率的增加呈剂量和时间依赖性。