阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以损害大脑记忆和认知功能为主的中枢神经系统变性性疾病，在老年人群中，AD的发病率仅次于心脑血管病和癌症。AD的病理学特征为大脑半球老年斑形成、神经纤维缠结和广泛性神经细胞死亡。构成老年斑的主要成分β-淀粉样蛋白(Amyloid beta protein，Aβ)在AD发病过程中起重要作用；Aβ可能通过扰乱细胞内钙稳态、产生氧化应激反应和放大兴奋性毒性作用等对神经细胞产生毒性损伤，但具体机制还不清楚。细胞内钙稳态失调可影响到能量代谢和物质代谢，引发一系列病理生理反应，现多认为它是许多外界因素引起细胞死亡的共同通路。所以研究Aβ引起细胞内钙稳态失调的途径将有助于临床选择新的治疗策略。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有多功能生物活性的细胞因子，能促进神经元的存活和增殖以及保护神经元免受损伤，国内研究bFGF多集中在其对缺血性脑损伤和脑外伤的保护作用上，对AD的作用研究不多。本实验主要从细胞水平研究bFGF对Aβ损伤的保护作用，以期为 第四军医大学硕士学位论文——临床应用bFGF治疗AD提供实验依据。 目的： 1．研究 AOI叫0对培养海马神经元的毒性作用和 bFGF的保护作用。 2．探讨A01叫。引起细胞内游离钙离子浓度厂C4入］i）升高及可能途径。 方法： l．随机选取体外培养7d的新生大鼠海马神经元，经不同浓度己老化处理的＊ 叫0慢性作用后，观察神经元形态变化；通过MTT比色实验和激光扫描共聚焦显微镜结合钙荧光探针FlllO上／AM标记的方法检测Apl叫0对神经元存活率和＊／”］；的影响。 2．选择相同的观察指标，以bFGF为保护因素，观察bFGF预作用24h后神经元对Apl叶0损伤的抵抗作用。同时观察了bFGF对HZO。引起神经元损伤的保护作用。 3．应用激光扫描共聚焦显微镜动态测量＊／勺i的方法，观察 L型钙离子通道阻滞剂尼莫地平和NMDA受体阻滞剂MK401对耶叫。升钙作用的影响。 结果： 1．海马神经元经 0．l、l、10pmol／L的 A61叫。作用 24h后，神经元形态、存活率和 ［C／勺；均发生了变化：神经元生长状态不良；各组 MTT比色实验所测得的光吸收值门D值）分别为0．30210＊30、0．254t0＊26、0．133t0刀09；细胞内游离钙离子浓度相对荧光值分别是2．53f0．76、3．17f0．72、6．97“0．74。随A61叶。浓度的增加，OD值减少，游离钙离子浓度相对荧光值增加，与对照组相比，这两项指标在较高剂量组门、10pmol／L组）有统计学差异（均P＜0＊5），低剂量组（0．IVmol／L组）无差异（伶0＊5）。 2．神经元经终浓度为20ng／ML的bFGF预作用24h后，再经不同浓度的帅叫0或HZOZ作用所测得的OD值分别为0．31910刀＊、0．31410刀27、 3 第四军医大学硕士学位论文0．300f0刀19和 0．37810刀68、0．380t0．044、0．355f0刀引，钙离子浓度相对荧光值分别是 2．26t0石8、2．38L0．76、2．5310．61 和 2．49t0．65、二．44f0．57、2．58f0．32，两项指标变化均不明显，与对照组相比，各剂量组无显著性差异 （均P＞0．OS）。 3．在无 C4“的 D爿。k，S液中，Ah叫0不能引起细胞［Caf勺i的升高，而在完全培养液中，Apl叫。可使细胞IC4y］i明显升高；应用尼莫地平后，Apl－40的升钙作用被部分抑制：而MK－801无抑制作用。 结论： 1．聚集态的邓叫0可以引起培养的海马神经元形态改变和存活率下降，并与其导致的细胞［C4勺；升高作用相一致，说明A到叫。的神经毒性机制可能与其升高神经元［C／勺；有关。 2，bFGF可以抑制A61叫0和HZOZ对神经元的损伤作用，其机理可能是通过稳定神经元＊勺；、抗氧化等途径实现的。 3．Apl叫。对神经元r4勺i的升高主要是通过细胞外C／“内流完成的，L型钙离子通道可能部分参与了这一过程。