目的：甲状腺激素（T₃）、血小板衍生生长因子（PDGF）在调控神经干细胞（NSC）的增殖与定向分化方面有着很重要的作用，它们之间存在着交互作用，甲状腺激素受体（THR）则可能是这种交互作用的枢纽，两者通过THR各亚型共同调控着CNS的正常发育。本研究将通过以下实验进一步认识NSC、T₃、PDGF以及THR之间的关系。 方法：本实验以胎龄为10-12周的人大脑皮质为材料，在体外成功诱导扩增NSC，用免疫细胞化学方法鉴定NSC，用BrdU标记和细胞克隆分析观察了NSC的增殖能力。以PDGF、T₃对NSC进行诱导分化，并分别用RT-PCR半定量法、ELISA法检测NSC在不同诱导因子作用下分化前后THR各亚型在转录与翻译水平上的表达变化，用免疫细胞化学方法鉴定分化后的细胞类型。 结果：（1）有丝分裂因子诱导培养的NSC nestin免疫细胞化学单染及与BrdU双染均为阳性，NSC分化细胞可见NF⁺、GC⁺、GFAP⁺；（2）NSC体外培养细胞克隆筛选最佳培养条件是：将NSC以2×10⁵细胞/mL密度接种于含FGF（10ng/mL）和PDGF（20ng/ml）的适应性培养基中进行扩增；（3）3月龄、5月龄人胎大脑、小脑、海马、丘脑、脑干及脊髓均有THR各亚型表达，其中3月龄胎脑THR各亚型表达中以THRα₁、THRα₂为主，THRβ₁次之，THR各亚型表达相对量在大脑、小脑、海马均高于其它脑区。5月龄胎脑THR各亚型表达中以THRβ₁、α₂为主，THRα₁次之，THRα₁表达相对量各脑区无差别，THRβ₁表达相对量在大脑、小脑、海马均高于其它脑区，THRα₂表达相对量则以脑干、脊髓为多；（4）实验中发现了与THRα₂始终伴行的特异条带，将其进行克隆测序后，证实该条带在371-412位氨基酸处比THRα₂少42个氨基酸，经分析认定为人大脑皮质THRα₃（5）纯化星形胶质细胞THR各亚型mRNA的表达以THRα₂为主，THRα₁、β₁表达较弱，其中THRβ₁略强于 天津医科大学硕士研究生论文·中文摘要 THRa；。THR各亚型在神经元中高表达，以 THRa。为主，THRa；高于 THR fi；； （6）T。诱导NSC分化后MBP“细胞约占80％，同时自身受体表达在经历时空性 变化后一致下调，表达水平均低于干细胞状态；（）PDGF诱导分化后 NF“ 细胞约占 80％，THR各亚型表达相对量均高于血清诱导分化组，THR a；、THR Q。、THR p 表达水平分别比血清诱导分化组上调30－50％、20－40％、10－30％。 但其表达水平仍低于厂细胞状态。THR O、p蛋白质表达趋势均为 NSC＞PDG卜 诱导分化绢)血请诱导分化织。 结沦：门)本实验在体外扩增的人＊C具有自我史新能力与增殖能力， 具有分化潜能，能向神经元、少灾胶质细胞及星形胶质细胞。：个方向分化： u)在脑发育过程中，mR各业型呈时空性表达：（3）首次证实了人大脑 皮质 THR a。序列；（4）THR各亚型在 NSC呈高表达，NSC分化后各亚型表达 相对量一致下调。THR各亚型在不同分化细胞中表达不一致：(0l；能诱导 NSC向少突胶质细胞分化，并通过THR各亚型的时空表达来发挥其重要生理 作用门印叩朴能引发VC向神经几分化，与10％血清诱导分化相比能在转 录与翻译水平上提高NSC分化后THR各亚型的表达 本研究结果将为深入研究T＊ 在脑发育中的作用提供宝贵的实验依据， 并对克汀病、亚克汀病以及mS脱髓鞘病等的临床治疗提供新途径，具有重 要指导意义。