黑胸散白蚁肠道内几种共生细菌的定量、定位及分离菌株Lactococcus sp.的初步研究

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白蚁是一类在自然界中广泛分布的社会性昆虫,在全世界已定名的白蚁有3000多种,其中低等白蚁约占15%。作为国际生态学研究的五大害虫之一,白蚁虽然对多种农林植物、木质建筑和堤坝船只等造成严重危害,但其在热带和亚热带森林中对枯木和土壤腐殖质的高效降解对促进自然界物质循环和改良土壤理化性质发挥了重要作用。白蚁对不同来源食物的消化与降解与其肠道内共生微生物的活动密切相关。黑胸散白蚁(Reticulitermes chinensis Snyder)为低等木食性白蚁,在我国境内广泛分布,是研究低等白蚁与其肠道微生物共生关系及其协同高效降解木质纤维素机制的良好模型。本论文在本实验室前期研究基础上,对该白蚁体内几种主要的可培养共生菌和一种占优势的共生细菌进行了定量及定位研究,并对分离自该白蚁的一株乳球菌(TSB-94)的理化性质进行了初步鉴定。主要研究结果如下:1.根据本实验室陈文等人对黑胸散白蚁肠道可培养共生菌多样性的研究结果,针对其中四种丰度较高的细菌即芽孢杆菌属细菌(Bacillus)、乳酸乳球菌属细菌(Lactococcus)、肠杆菌属细菌(Enterobacter)和链球菌属细菌(Streptomyces)的16S rRNA基因设计群特异性引物,以白蚁肠道总DNA为模板运用荧光定量PCR技术研究表明,肠杆菌属细菌在该白蚁肠道总的共生细菌群落中所占比率为2.93%,是数量最多的一类可培养细菌。而乳酸乳球菌属细菌、芽孢杆菌属细菌和链球菌属细菌在肠道总菌群中所占比例较小,分别为0.5%,0.2%和0.04%,说明在黑胸散白蚁肠道内这些可培养细菌不是占优势的共生菌群。2.白蚁菌群1(termite group1, TG1)是黑胸散白蚁肠道中一种优势共生细菌。本论文利用荧光原位杂交技术以针对这类细菌16S rRNA基因序列的群特异性探针TG1-216的研究表明,在该白蚁肠道内白蚁菌群1主要分布于超鞭虫Trichonympha agilis和两种锐滴虫细胞内。3.对从黑胸散白蚁肠道分离培养得到的一株乳酸乳球菌Lactococcus sp. TSB-94进行了初步的鉴定,研究表明该菌16S rDNA序列与来自栖北散白蚁的一株非培养的乳酸乳球菌的序列相似性最高,为99%,而与从黑胸散白蚁肠道分离的一个乳球菌克隆序列相似性为98%,说明乳球菌是低等白蚁肠道内稳定存在的一种共生细菌。TSB-94能代谢纤维二糖、葡萄糖、甘露糖等多种糖类物质,推测乳酸菌在木食性白蚁纤维素代谢途径的中间产物代谢中起着重要的作用。本研究的结果对最终阐明木食性白蚁与其肠道共生微生物协同降解木质纤维素的机制具有重要的理论意义。
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