论文部分内容阅读
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)广泛分布于自然界,特别是与发酵食品密切相关,具有改善发酵食品的风味和品质的功效,拮抗病原微生物、预防和治疗腹泻、便秘、改善微生态平衡等功效。目前,植物乳杆菌发挥益生作用的分子机制和蛋白物质基础还不清楚,因此,深入开展植物乳杆菌蛋白质组学研究具有重要意义。本研究分别进行了植物乳杆菌全菌蛋白样品和上清蛋白样品的双向电泳及BN/SDS-PAGE电泳,构建了相对应的参考图谱,对图谱上所有可见的蛋白点进行胶内酶切,通过MALDI-TOF/TOF质谱分析及Mascot软件在L. plantarum JDM1数据库中(GI:254044096)进行质谱数据分析,总共鉴定出429个蛋白。通过本研究主要获得了以下结果：1、采用重叠的窄pH梯度胶条对植物乳杆菌生长对数晚期全细胞蛋白样品进行双向电泳,并将双向电泳图谱合成为一张pH 3.5-10的双向电泳参考图谱,对表达丰度较高、且在胶图上清晰可见的725个蛋白质点进行取点、胶内酶切,最终鉴定到有效蛋白点603个,代表412个编码蛋白,其中包含122种未注释功能的假想蛋白。2、采用宽范围pH 3-11度胶条对植物乳杆菌上清蛋白进行双向电泳,构建了上清蛋白双向电泳参考图谱,在上清蛋白中总共鉴定出28个有效蛋白点,代表22种蛋白,其中有11个蛋白为假想蛋白。3、通过BN/SDS-PAGE技术成功开展了植物乳杆菌蛋白复合物研究,从图谱中鉴定出51个蛋白,其中6个蛋白为前述双向电泳参考图谱中没有出现的蛋白,预测Map3、Map2两蛋白在体内可能形成蛋白复合物。通过本研究,从蛋白分子水平上分析了植物乳杆菌生长对数晚期蛋白表达的特点,为以后深入研究植物乳杆菌的益生作用及基因改造提供了新的研究策略。