【摘 要】
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自2017年起,由新型鹅星状病毒(GoAstV)造成的致死性小鹅痛风在我国多个省份爆发,对我国的家禽业造成了巨大的经济损失。为了探索GoAstV感染造成的小鹅痛风的传播与流行,本研究于2018~2019年从我国的河南、安徽、湖北三个省份的7个鹅场收集了165个临床样品,运用PCR(RT-PCR)方法对它们分别进行GoAstV、鹅细小病毒(GPV)、呼肠孤病毒(REOV)、鹅出血性多瘤病毒(GHPV
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自2017年起,由新型鹅星状病毒(GoAstV)造成的致死性小鹅痛风在我国多个省份爆发,对我国的家禽业造成了巨大的经济损失。为了探索GoAstV感染造成的小鹅痛风的传播与流行,本研究于2018~2019年从我国的河南、安徽、湖北三个省份的7个鹅场收集了165个临床样品,运用PCR(RT-PCR)方法对它们分别进行GoAstV、鹅细小病毒(GPV)、呼肠孤病毒(REOV)、鹅出血性多瘤病毒(GHPV)和坦布苏病毒(TMUV)的筛查并统计各自阳性率,结果发现GoAstV、GPV、REOV、GHPV、TMUV的阳性率分别是100%、9.69%、3.64%、0%、0%,再次证明了GoAstV是流行性小鹅痛风的诱发病原,随后本研究最终从样品中分离出了7株GoAstV毒株并对它们进行全基因组序列测定。本研究获得的7株GoAstV病毒的全序列长度都是7170 nt,共包含三个开放阅读框(ORFs),即ORF1a、ORF1b和ORF2。通过7株星状病毒的全基因组和各基因对应氨基酸序列进行系统进化分析,结果表明这些毒株都属于禽星状病毒属,与近年来我国新爆发的GoAstV属于同一进化树分支,与禽星状病毒3和火鸡星状病毒2的遗传亲缘关系较近。序列分析结果表明ORF1a和ORF2序列的突变率较高,且ORF1a在氨基酸的545~580位置间出现高突变率,分析发现突变后的ORF2的三级结构发生较大改变,且抗原表位区存在高度突变,或许由宿主抗体压力所诱导相关。这些发现可以丰富我们对GoAstV分子流行病学的理解,为疫苗株的筛选奠定基础。为了更好地对小鹅痛风进行临床诊断和流行病学监控,本研究针对鹅新型星状病毒建立了一种快速、特异、灵敏的反转录环介导等温扩增反应(RT-LAMP)检测方法。根据ORF1b基因的保守区设计并筛选出两组引物,最终确定采用一引物组在水浴锅中完成RT-LAMP的检测,反应的最佳温度和时间分别为61℃和30 min,利用琼脂糖凝胶电泳和染料指示剂显色对RT-LAMP结果进行评估。RT-LAMP法检测GoAstV分别基于琼脂糖凝胶电泳结果和肉眼检测颜色变化所判定的的灵敏度,与荧光定量法灵敏度相同。将优化好的RT-LAMP方法应用于临床样品检测,该方法所用引物组可特异性地检测GoAstV,并没有与其他常见的禽类病原体发生交叉反应。这些研究结果证实,GoAstV的RT-LAMP法简便、快速、特异、灵敏,非常适合在基层单位的现场和实验室中推广应用。
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