以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。以IBRV Bartha Nu/67株的DNA作为模板,分六段扩增编码糖蛋白E的基因,并克隆至pET32a表达载体中。在大肠杆菌中进行表达,其中两个为可溶性重组蛋白pET32gEE和pET32gEB。重组蛋白纯化后,经免疫印迹试验和间接ELISA检测证明具有良好的抗原性和特异性。以重组蛋白pET32gEE为诊断抗原成功建立了检测gE抗体的间接ELISA诊断方法。应用IBRV全病毒及gE-ELISA诊断方法分别检查了我国部分地区的牛血清,结果这些地区的IBRV感染率分别为67.10%和68.74%。用纯化的IBRV、重组pET32gEE和pET32gEB蛋白为免疫原,分别免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术获得了3株分泌抗IBRV单克隆抗体(McAb )的杂交瘤细胞;2株分泌抗gEE单克隆抗体的杂交瘤细胞和2株分泌抗gEB单克隆抗体的杂交瘤细胞。这些单克隆抗体用双抗体夹心ELISA试验可区别IBRV阳性血清与阴性血清;同时gEE单抗和gEB单抗可初步区别gE缺失株和gE非缺失株。