【摘 要】
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目的:探讨通过双向调控时钟基因Bmal1,观察其对鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长的影响及与放疗敏感性的关系。方法:采用慢病毒感染方法,构建Bmal1基因过表达组(CNE1OE)、过表达对照
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目的:探讨通过双向调控时钟基因Bmal1,观察其对鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长的影响及与放疗敏感性的关系。方法:采用慢病毒感染方法,构建Bmal1基因过表达组(CNE1OE)、过表达对照组(CNE1OENC)、低表达组(CNE1sh3)、低表达对照组(CNE1sh NC)四株细胞,用Western Blot验证各组细胞Bmal1蛋白表达情况;将四株细胞分别皮下注射于相应的四组裸鼠,待移植瘤生长后测量其体积;给予6-Me V电子线15Gy照射裸鼠移植瘤,观察放疗后各组移植瘤体积变化情况。剥离移植瘤后,采用RT-PCR及Western Blot分别检测Bmal1、P53、P21mRNA及蛋白表达情况。结果:Western Blot结果提示,与各自对照组对比,CNE1OE组Bmal1蛋白过表达,CNE1sh3组Bmal1蛋白低表达,表明细胞转染成功。成功构建裸鼠移植瘤模型后,第15天移植瘤体积(单位:mm3)分别为:CNE1OE组10.34±7.21,CNE1OENC组44.71±26.30,CNE1sh3组211.84±27.36,CNE1sh NC组40.16±17.63;第18天分别为:CNE1OE组28.16±13.75,CNE1OENC组142.91±94.23,CNE1sh3组372.05±110.72,CNE1sh NC组109.91±49.63;第21天分别为:CNE1OE组54.90±26.47,CNE1OENC组240.80±81.43,CNE1sh3组868.49±294.54,CNE1sh NC组269.18±52.88.CNE1OE组裸鼠移植瘤体积明显小于CNE1OENC组(P<0.05),CNE1sh3组体积明显大于CNE1sh NC组(P<0.05)。放疗后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1sh NC组裸鼠移植瘤体积与自身放疗前相比均缩小(P<0.05),其中CNE1OE组缩小最明显。CNE1sh3组放疗前后自身体积变化无统计学意义;CNE1OE组放疗后体积较放疗前缩小77.2%±7.4%。Bmal1基因、P53及P21的mRNA及蛋白相对表达量在CNE1OE组明显高于CNE1OENC组(P<0.05),CNE1sh3组则明显低于CNE1sh NC组(P<0.05)。结论:Bmal1基因过表达能抑制鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长,增强其放疗敏感性,可能与P53蛋白、P21蛋白上调相关;敲低则促进移植瘤生长,导致其辐射抗拒,可能与P53蛋白、P21蛋白表达下调有关。
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