皮肤恶性黑素瘤中uPA、MMP-9基因甲基化的相关研究

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目的:(1)研究皮肤恶性黑素瘤中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因启动子区甲基化状态与其mRNA表达的关系。(2)探讨uPA、MMP-9基因甲基化在皮肤恶性黑素瘤发生和发展中的作用。方法:(1)体外培养人表皮恶性黑素瘤A375细胞系,采用MTT法观察S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对A375细胞增殖的影响。(2)按不接受和接受不同浓度SAM(100,250,400μmol/L)干预2天,3天,5天,分别将A375细胞系设立为对照组和处理组。采用半定量PCR(RT-PCR)法比较对照组和处理组A375细胞系uPA、MMP-9mRNA转录水平的差异。(3)采用甲基化特异性多聚酶链反应法(MS-PCR)比较两组A375细胞系uPA、MMP-9基因启动子区甲基化状态的变化。结果:(1)MTT结果显示SAM对A375细胞增殖有抑制作用。(2)uPA、MMP-9 mRNA在对照组A375细胞中均显著表达,且基因启动子区分别呈完全去甲基化或部分去甲基化状态。(3)经SAM干预后uPA、MMP-9 mRNA表达不同程度降低,并且SAM对基因转录的抑制作用呈剂量和时间依赖性;同时uPA、MMP-9基因启动子区去甲基化程度逐渐降低,发生不同程度高甲基化。结论:SAM干预后显著降低皮肤恶性黑素瘤A375细胞中uPA、MMP-9mRNA表达,这种表达的降低可能与uPA、MMP-9基因启动子区出现的高甲基化有关。因此,uPA、MMP-9基因低甲基化可能对皮肤恶性黑素瘤发生和发展起一定作用。
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