细胞凋亡(apoptosis)是由基因控制的细胞自主的有序的细胞死亡，是细胞程序性死亡(programmed cell death, PCD)的一种方式。对于多细胞动物个体，细胞凋亡在正常发育、免疫耐受的形成、自稳态的维持、肿瘤监控等过程中均发挥重要作用。在近半世纪的研究中发现，细胞凋亡的异常导致很多疾病如神经退化性疾病、自身免疫疾病和癌症的发生，特别是与恶性肿瘤的发生、发展以及预后有密切关系。因此阐明细胞凋亡中的信号转导机制，可以为抗肿瘤药物的研发提供可能的药物靶点，最终有效地治疗肿瘤等人类疑难性疾病。细胞凋亡进程受到多种细胞信号的调控，其中有两条关键性通路诱导细胞凋亡：死亡受体介导的激活Caspase-8、Caspase-3的外源型途径和线粒体释放的细胞色素c与胞浆中Apaf-1、Capsase-9前体结合形成凋亡复合物(apoptosome)激活Caspase-9的内源型途径。另外，外源型途径经常需要通过线粒体介导的内源型途径来放大凋亡信号，因此线粒体是细胞凋亡的调控中心。PKCδ是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，广泛存在于哺乳动物细胞中，其通过催化蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基的磷酸化来调控细胞信号转导途径。在细胞凋亡过程中，PKCδ被激活并转位到线粒体上。Smac蛋白质是一种低等电点IAPs结合蛋白质，其在正常细胞中以二聚体的形式存在于线粒体内。文献报道，Smac蛋白质在受到凋亡因子的刺激时释放到胞浆中，通过结合并抑制IAPs、促进IAPs泛素化和降解，从而行使促凋亡功能。基于对PKCδ和Smac蛋白质的文献调查，我们推测在细胞凋亡过程中PKCδ转位到线粒体后可能通过磷酸化Smac蛋白质介导其释放，或通过调节Smac蛋白质和IAPs的相互作用调控细胞凋亡的进程。在本论文中，为验证PKCδ在细胞凋亡过程中能够磷酸化Smac蛋白质，我们首先建立PKCδ参与的细胞凋亡体系；同时，采用体外激酶反应验证PKCδ可在细胞外磷酸化Smac蛋白质，并采用MALDI-TOF分析方法结合分子生物学方法，确定磷酸化位点；然后，采用免疫共沉淀方法分析PKCδ和Smac蛋白质在细胞凋亡过程中是否存在相互作用。最后，在PKCδ参与的细胞凋亡体系中采用Western blot方法分析Smac蛋白质的释放情况。在本论文的研究中，我们得到以下研究结果：1）建立了PKCδ参与的细胞凋亡体系：人参皂甙G-Rh2诱导SK-HEP-1细胞凋亡；同时，PKCδ的特异性抑制剂Rottlerin抑制人参皂甙G-Rh2诱导的SK-HEP-1细胞凋亡。2）在细胞外，PKCδ磷酸化Smac蛋白质的T118、S119、S126以及S164位点，提示在细胞凋亡过程中，Smac蛋白质的T118、S119、S126以及S164位点为PKCδ潜在的磷酸化位点。3）在PKCδ参与的细胞凋亡体系中，PKCδ被激活并转位到线粒体上，然而其对Smac蛋白质的释放没有明显作用。我们的研究结果表明在细胞凋亡过程中PKCδ被激活并转位到线粒体，与线粒体蛋白质Smac发生相互作用。PKCδ介导的Smac磷酸化不能有效调控Smac蛋白质的释放，提示PKCδ可能调节Smac和IAPs的相互作用调控细胞凋亡的进程。