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猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)为主要致病原引起的一种猪的传染性综合征。PCV2可以损害感染猪的淋巴细胞,造成免疫抑制,为多种病原的继发感染和混合感染提供了条件,进而引发更为严重的危害。目前,对PCVD尚缺乏有效的治疗措施,疫苗免疫接种是防控本病的主要手段。对猪群抗体的检测分析是评价疫苗免疫效果、病毒感染和制定免疫程序的主要指标。本研究对2016年从陕西省不同地区、不同规模猪场收集的544份血清中PCV2进行了检测,并对PCV2抗体进行了检测,分析了猪场PCV2的感染和抗体状况,为PCVD的防控提供基础资料。目前,国内使用的猪圆环病毒疫苗主要为全病毒灭活疫苗和亚单位疫苗,灭活疫苗存在需要抗原量大、免疫反应慢等问题;亚单位疫苗的免疫效果较好,但也存在成本高、激发免疫反应慢的问题。为此,在前期研究的基础上,本研究将非致病的猪圆环病毒1型(Porcine circovirus type 1,PCV1)的Rep基因和PCV2的Cap基因分别克隆后,进行连接,然后插入到自杀性疫苗载体pSCA中,构建了pSCA-Cap-T2A-Rep重组载体,将其作为核酸疫苗免疫小鼠,进行免疫效果评价,为PCV2核酸疫苗的研究提够新的思路和基础材料。本论文获得以下结果:1.从陕西省的7个地区的猪群中采集血清544份,其中PCV2疫苗免疫的规模化猪场血清320份,免疫背景不清楚的血清224份。抗体检测结果显示,544份血清中PCV2抗体阳性率67.6%(368/544);其中免疫猪场PCV2抗体阳性率为84.7%(271/320),免疫背景不清楚的猪场PCV2抗体阳性率为43.3%(97/224)。2.对收集的544份血清通过PCR方法检测PCV2,结果发现阳性阳性率为18.9%(103/544)。其中免疫猪场的PCV2阳性率为10.0%(32/320),免疫背景不清楚的猪场血清中PCV2阳性率为31.7%(71/224)。提示疫苗免疫并不能阻止PCV2野毒的感染,但可以大大降低病毒的感染率,提示在猪圆环病毒病的防控中,疫苗免疫后除了检测抗体水平外,还要对PCV2病原进行检测,更好地防控PCVD的发生。3.分别克隆PCV1的rep全基因和PCV2的Cap基因,通过T2A片段连接后,获得目的片段Rep-T2A-Cap,将其插入到pSCA载体,获得重组表达载体pSCA-Cap-T2A-Rep。将重组载体转染PK15细胞,Western Blot方法检测到目的蛋白的表达。4.将重组质粒大量提取后,作为核酸疫苗免疫小鼠,通过检测血清抗体评价其免疫效果。试验组3组(按免疫质粒量分为50μg/只组、100μg/只组、200μg/只组,分别标号第1、2、3组);同一免疫质粒组组再设添加佐剂对照组(标号第4、5、6组);生理盐水对照组1组(标号第7组);生理盐水佐剂对照组1组(标号第8组)。免疫程序为:0 d首免,14 d第二次免疫,免疫剂量与部位与首免相同。免疫后第0 d、14 d、21 d和28 d小鼠眼静脉丛采血检测抗体。结果表明:试验组与生理盐水对照组小鼠比较,产生了特异性抗PCV2抗体(p<0.01);免疫+佐剂组比不用佐剂组小鼠特异性抗体水平显著升高(p<0.05);高剂量组(100μg/只与200μg/只组)与低剂量组(50μg/只组),抗体水平显著增高,差异显著(p<0.01)。