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[目的]了解RNA体内干扰遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠肾脏钙敏感受体(CaSR)后,肾脏组织钙转运相关蛋白的表达及尿钙排泄的变化及其可能机制。[方 法]1、通过反复选取尿钙排泄量最高的雄雌大鼠,相互交配繁殖下一代,6代后建立起遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠模型;2.20只雄性GHS大鼠和20只雄性正常尿钙对照组大鼠(Normal control rats,NC)大鼠随机分为5组,每组4只,第1-4组采用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰试验,第5组接受生理盐水干预作为对照组。采用外科手术方法将病毒载体从肾静脉导入肾脏内;2.3第1-4组大鼠分别于注射病毒后3天、7天、14天、21天处死,第5组大鼠于注射后21天处死,取出双肾;分别于上述5个时间点处死大鼠前应用全自动生化分析仪测定各组大鼠的2个24h尿钙(对照组每个时间点均测尿钙),计算24小时尿钙排泄量;3、应用大鼠的双肾标本,通过RT-PCR和Western-Blot技术检测大鼠肾上皮细胞钙转运相关蛋白(CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2)mRNA和蛋白表达水平。[结果]:1、成功构建了遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠模型。2、与对照组大鼠相比,GHS组大鼠用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后3-21天,24小时尿钙排泄量减少,差异具有统计学意义(P<0.05);NC组大鼠24小时尿钙排泄量较前稍有减少,但较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。3、用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,RT-PCR检测 CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2 的 mRNA 量。GHS 组大鼠:与对照组相比,CLDN14、NHE3的mRNA表达量在3-21天减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);TRPV5、AQP2、NKCC2的mRNA表达量在7-21天增加,差异有统计学意义(P<0.05)。NC组大鼠:与对照组相比,上述5个基因的mRNA量均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。4、用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,Western-Blot检测CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2蛋白的表达水平。GHS组大鼠:与对照组相比,CLDN14蛋白的表达水平在3-21天下调,NHE3蛋白的表达水平在3-14天下调,差异均有统计学意义(P<0.05);TRPV5、AQP2、NKCC2蛋白的表达水平在7-21天上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NC组大鼠:与对照组相比,上述5种蛋白的表达水平均无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.5)。[结论]1、通过反复选取尿钙排泄量最高的雄雌大鼠,相互交配繁殖下一代,6代后可以建立起遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠模型。2、通过CaSR-miRNA干扰病毒体内干扰遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠,干扰后24小时尿钙排泄量下降,正常大鼠尿钙对照组(NC)大鼠则未观察到此现象。3、通过CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,GHS组大鼠肾脏组织中CLDN14、NHE3基因mRNA表达量下降,TRPV5、AQP2、NKCC2的mRNA上升,NC组大鼠肾脏组织中上述各基因的表达水平无明显变化。4、通过CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,GHS组大鼠肾脏组织中CLDN14、NHE3蛋白的表达水平下调,TRPV5、AQP2、NKCC2蛋白的表达水平上调,NC组大鼠肾脏组织中上述各蛋白的表达水平无明显变化。