天麻素对体外培养雪旺细胞增殖及其NGF表达的影响

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目的:通过实验观察天麻素(Gastrodin)对体外培养雪旺细胞(SchwannCell,SCs)增殖及NGF表达的影响。方法:取出生3-5天SD大鼠10只,解剖显微镜下无菌取出坐骨神经,剪碎后进行细胞培养,经过纯化后进行细胞传代培养,用S-100免疫组化鉴定雪旺细胞的纯度,然后分别用浓度为0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml的天麻素血清+DMEM培养基进行培养,应用MTT观测雪旺细胞增长曲线,采用共焦激光扫描显微镜技术对传代雪旺细胞内NFG表达水平进行测定。结果:接种48h可看到贴壁生长的雪旺细胞,其胞核多为长形或圆形;胞体呈现立体感、饱满的梭形体,两端有细长的突起,周围有亮带。第5d起,细胞胞体开始肩并肩平行排列,自第10日,呈现出“端端相对,极极相对”等网状或旋涡状规律排列,形如“地毯”。经过S100免疫组化检测,结果显示培养的坐骨神经雪旺细胞纯度达到92%。MTT比色实验结果显示:正常对照组中,雪旺细胞在24~72h出现快速增殖态势;72h后继续增殖,但速度减缓,OD值逐日缓慢下降;自第5d起于倒置相差显微镜下可见雪旺细胞的胞体出现膨大、形态的立体感减弱。雪旺细胞增殖趋势0.1mg/ml天麻素组与正常组相近,但每一个时间点较正常组峰值均低,自48h开始与正常组出现显著差异。0.05mg/ml天麻素组雪旺细胞呈现持续快速增殖现象,48h开始与天麻1组出现差异,72h与正常组出现差异。0.025mg/ml天麻素组雪旺细胞总体增殖趋势和OD值均与正常组相近,48h开始于0.1mg/ml天麻素组出现差异,72h与0.05mg/ml天麻素组出现差异。共焦激光扫描显微镜自采集图像显示:天麻素浓度为0.05mg/ml时,雪旺细胞内NGF的表达水平较其它各组别高,天麻素浓度为0.1mg/ml时,雪旺细胞内NGF的表达水平最差。结论:1、雪旺细胞的增殖分化程度可以直接影响NFG的表达水平。2、天麻素浓度为0.1mg/ml时持续应用,可在一定程度内对雪旺细胞的增殖分化以及NFG表达产生抑制作用,而天麻素浓度为0.025mg/ml时持续应用,对改善雪旺细胞的增殖分化以及NFG表达作用不大。3、天麻素浓度为0.05mg/ml时持续应用,可有效提高雪旺细胞的增殖分化以及NFG表达水平。
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