马尾藻多糖分离提取及药理活性研究

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本论文以广西涠洲岛的马尾藻为原料,进行了以下的研究内容:   比较传统水煮法、超声波破壁法、微波处理法和酶解法对马尾藻多糖提取率的影响,并对提取物进行理化性质分析和还原糖含量测定;通过气相色谱、红外光谱和旋光度测定,初步分析马尾藻多糖的组成及结构;不同浓度的马尾藻多糖溶液腹腔注射给予地塞米松制作小鼠免疫抑制模型,观察马尾藻多糖对小鼠细胞因子及体内抗氧化能力的影响;通过清除羟自由基、超氧阴离子和抑制红细胞溶血试验观察马尾藻多糖的体外抗氧化活性;将马尾藻多糖添加到奥尼罗非鱼的饵料中,测定生长性能、血液生化和非特异性免疫指标;海豚链球菌人工感染奥尼罗非鱼观察马尾藻多糖的保护率;马尾藻多糖加入鸡脾脏淋巴细胞中培养,观察不同浓度的马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞内氧化还原状态的影响。   结果:(1)在四种提取方法中,酶法提取率最高,提取率为11.38%。理化分析表明提取物中含糖且不含淀粉、蛋白质和氨基酸。多糖精制纯化后还原糖量达87.76%;马尾藻多糖的旋光度[α]1λ为+79~+80,从红外光谱图谱可见有-OH伸缩振动、C-H伸缩振动、结晶水、葡萄糖残基的α-吡喃糖和α-D-吡喃糖的吸收峰,判断提取物为较纯的马尾藻多糖。气相色谱分析表明马尾藻多糖主要含果糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖,其摩尔比为33.48:16.38:4.22:2.55:0.56:0.38;(2)马尾藻多糖对免疫抑小鼠的影响,马尾藻多糖3个剂量组(50mg/kg,100mg/kg和200mg/kg体重)能显著提高小鼠脾脏指数和小鼠胸腺中GSH含量(P<0.05),极显著提高免疫抑制小鼠血浆中IL-6(P<0.01);马尾藻多糖剂量为50mg/kg体重极显著降低TNF-α含量(P<0.01);(3)马尾藻多糖4个剂量组(50mg/L,100mg/L,200mg/L和400mg/L)均具有清除羟自由基和抗溶血能力,且随浓度增加而升高;马尾藻浓度50mg/L时对超氧阴离子清除作用最强;(4)马尾藻多糖在饵料中添加量为0.05%时,能极显著提高奥尼罗非鱼的增重率、特定生长率和降低饲料系数(P<0.01),并能显著提高奥尼罗非鱼血液中红细胞数、总蛋白和血糖含量(P<0.05);马尾藻多糖添加量为0.1%时能极显著提高罗非鱼血液总蛋白含量(P<0.01)和显著提高血液中超氧化物歧化酶、溶菌酶和酸性磷酸酶的活力(P<0.05);马尾藻多糖添加量为0.2%时极显著提高奥尼罗非鱼血液中总蛋白含量和酸性磷酸酶活力(P<0.01);(5)马尾藻多糖能显著提高人工感染海豚链球菌奥尼罗非鱼的存活率且随浓度增加存活率增加;(6)马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞细胞内氧化还原状态有一定影响,使免疫细胞趋于还原状态。
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