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柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）是鸡球虫种类中对鸡群危害最严重的一种,需采用分离法将E.tenella从混合的球虫中分离提纯出来。由于抗球虫药物的大量使用,导致耐药性和药物残留日益严重。根据研究,在雏鸡日粮中添加中草药能够抑制球虫对鸡肠道的入侵。本课题通过单卵囊分离技术获得E.tenella;通过石榴皮对感染球虫疫苗的雏鸡的生长性能、抗球虫效果、肠道形态、血清生化和抗氧化指标的影响,探索石榴皮对鸡球虫病的预防与治疗效果,为石榴皮的应用价值提供理论支持。主要研究结果如下:1.E.tenella分离、鉴定分离新鲜粪便的球虫卵囊,采用琼脂糖包埋法进行纯种单卵囊鉴定,感染20只1～7日龄健康雏鸡,根据形态学和分子生物学鉴定为E.tenella,对其分离株进行二代单卵囊雏鸡感染试验,研究显示,该球虫寄生的特定部位在盲肠,最短潜隐期119h,孢子化最短时间18 h,卵囊形态为卵圆形,卵囊壁颜色为浅黄色,卵囊形态大小为16.80～26.80μm×14.40～27.20μm,平均大小为20.55×17.27μm,形状指数1.19。2.石榴皮对鸡球虫病的预防效果研究7日龄雏鸡,分成5组,分别为石榴皮低剂量组（1 g/kg）、高剂量组（3 g/kg）、盐霉素组（600 mg/kg）、阴性组和阳性组,分组当天对雏鸡进行药物预防,直至试验结束。14日龄时,除阴性组外,其余4组每只雏鸡攻虫1 m L（5.5×10~4个,含柔嫩、巨型、毒害、堆型4种卵囊）。22日龄早上空腹称重后,每组随机抽取20只雏鸡翅下采血。试验结果如下:2.1石榴皮对雏鸡生产性能的影响低石榴皮组和高石榴皮组的平均体重、平均增重相比于阳性组极显著增加,日均增重分别比阳性组提高了15.04%（P＜0.01）、6.21%（P＞0.05）,其中低石榴皮组日均增重与盐霉素组相比无显著差异,料重比与阳性组相比差异显著。结果表明,饲料中提前添加石榴皮,能够预防球虫对雏鸡的侵袭,提高雏鸡生产性能,低石榴皮组效果好于高石榴皮组。2.2石榴皮对雏鸡抗球虫效果的影响各试验组的血便情况、病变值均比阳性组明显减轻;低石榴皮组与盐霉素组排卵数相近,阳性组卵囊排出数最高;低剂量组、高剂量组和盐霉素组ACI分别为167.98、163.7、173.58,均属于中效抗球虫药。结果表明,雏鸡感染球虫前,添加石榴皮能够减轻血便、卵囊数和病变值,并能提高ACI,其中低剂量组抗球虫效果与盐霉素相近。2.3石榴皮对雏鸡血清生化指标的影响低石榴皮组和高石榴皮组ALB、TP、GLB、TG、ALP含量均比阳性组增加,差异不显著;石榴皮两组的CR含量与阳性组相比均降低,差异不显著。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的ALB、TP、GLB、TG和ALP的含量,降低因雏鸡感染球虫升高的CR含量。2.4石榴皮对雏鸡血清抗氧化指标的影响石榴皮两组与阳性组相比,MDA含量均降低、GSH-PX和SOD含量均增加,但差异均不明显;低石榴皮组的T-AOC活性极显著高于阳性组、显著高于高石榴皮组。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的GSH-PX、SOD和T-AOC的活性,降低因雏鸡感染球虫升高的MDA的含量,维持雏鸡正常的营养代谢。2.5石榴皮对雏鸡肠道形态的影响除高石榴皮组的VH低于阳性组外,其余试验组十二指肠、空肠和回肠的VH、VH/CD均高于阳性组。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的VH、VH/CD,促进雏鸡对日粮的吸收,低石榴皮组改善效果优于高石榴皮组,与盐霉素组效果相近。3.石榴皮对鸡球虫病的治疗效果研究14日龄雏鸡,分成5组,分别为石榴皮低剂量组（1 g/kg）、高剂量组（3 g/kg）、托曲珠利（25 mg/L）组、阴性组和阳性组,除阴性组外,其余4组每只雏鸡攻虫1m L（5.5×10~4个,含柔嫩、巨型、毒害、堆型4种卵囊）,雏鸡感染球虫成功后给药,直至试验结束。25日龄早上空腹称重,每组随机抽取20只雏鸡翅下采血。试验结果如下:3.1石榴皮对雏鸡生产性能的影响石榴皮两组的平均体重极显著高于阳性组,其余各试验组间差异不显著;高石榴皮组的平均增重、平均日增重显著高于阳性组;各试验组的料重比均比阳性组降低,其中高石榴皮组比低石榴皮组、托曲珠利组分别降低了5.03%（P＞0.05）、0.58%（P＞0.05）。结果表明,饲料中添加石榴皮,能够减轻球虫对雏鸡的侵袭,改善雏鸡的生产性能指标,高石榴皮组效果好于低石榴皮组。3.2石榴皮对雏鸡抗球虫效果的影响给药治疗后,各试验组的血便情况、病变值均比阳性组明显减轻,高剂量组卵囊排出数最低,阳性组卵囊排出数最高。低剂量组的ACI为151.51,属低效抗球虫药,高剂量组和托曲珠利组ACI分别为164.92、163.85,属中效抗球虫药。结果表明,在饲料中添加石榴皮治疗,能够减轻血便、卵囊数和病变值,并能提高ACI,其中高剂量组的石榴皮抗球虫效果较好。3.3石榴皮对雏鸡血清生化指标的影响各试验组ALB、TP、GLB、TG含量均比阳性组提高,差异性不明显;相比于阳性组,高石榴皮组CR含量明显降低,石榴皮两组的ALP活性均极为明显的增加,各试验组间无显著差异。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的ALB、TP、GLB、TG和ALP的含量,降低因雏鸡感染球虫升高的CR含量。3.4石榴皮对雏鸡血清抗氧化指标的影响各试验组MDA、GSH-PX含量差异均不显著,但低石榴皮组和高石榴皮组MDA含量均低于阳性组,GSH-PX含量均高于阳性组;石榴皮两组的SOD与阳性组无显著差异;高石榴皮组血清T-AOC活性极显著高与阳性组,与阴性组无显著差异。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的GSH-PX、SOD和T-AOC的活性,降低因雏鸡感染球虫升高的MDA含量,维持雏鸡正常的营养代谢。3.5石榴皮对雏鸡肠道形态的影响石榴皮两组的十二指肠、空肠和回肠的VH和VH/CD均高于阳性组,与阴性组相比有所降低,但差异均不显著。结果表明,石榴皮能提高因雏鸡感染球虫降低的VH、VH/CD,高石榴皮组改善效果优于托曲珠利组,低石榴皮组效果最差。综上所述,采用单卵囊分离技术获得了E.tenella虫株;雏鸡感染球虫前、后,在日粮中添加石榴皮与阳性组相比,能有效提高雏鸡的生长性能,同时对血清蛋白、酶有不同程度的提高,改善了雏鸡的抗氧化能力;石榴皮具有一定的抗球虫效果,低剂量预防组ACI达到167.98,高剂量治疗组ACI达到164.92,均为中效抗球虫效果,此外石榴皮能够保护肠绒毛完整性,提高VH/CD,减少球虫对肠道的损伤。雏鸡感染球虫前后,添加石榴皮有一定的预防和治疗效果,具有一定的开发前景。