论文部分内容阅读
背景:慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)是一种常见的慢性气道炎症性疾病,呈现不可逆且进行性进展的气流受限。慢阻肺病程迁延,患者肺功能进行性下降,糖皮质激素治疗效果欠佳。白介素17A(Interleukinl7A,IL17A)在慢阻肺中常与中性粒细胞,气流受限程度和疾病严重程度相关。此外,激素无效型慢阻肺与Th17因子密切相关。目前认为除Th17细胞外,先天性免疫细胞及结构细胞亦是IL17A的分泌来源,其在疾病早期启动先天性免疫及时清除致病原,同时诱导Th17的发育趋化。研究显示香烟烟雾能显著诱导气道上皮分泌IL17A,但是目前并未深入阐明气道上皮来源的IL17A在慢阻肺中是否起到关键调控作用。目的:本课题拟探讨气道上皮来源的IL17A在慢阻肺中的关键调控作用,并探索可能的作用机制。方法:本课题体外利用人气道上皮细胞系(Human bronchial epithelial cell,HBE)给予IL17A及IL17R等小干扰RNA沉默对应基因,再给予香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)干预后检测炎症黏液及相关信号通路的变化,明确气道上皮来源IL17A的关键调控作用及具体分子机制。本课题进一步用多西环素诱导的气道上皮特异性敲除IL17A转基因小鼠(CCl0-rtTA/(tetO)7-Cre/IL17Aflox/flox),构建慢阻肺模型,通过支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)分类计数,H&E及PAS染色,荧光定量PCR或western blot等方法检测肺组织炎症及JNK/AP1信号通路等指标的变化,从体内整体模型明确气道上皮来源的IL17A对慢阻肺气道炎症的调控作用。结果:(1)香烟烟雾能够诱导气道上皮产生IL17A。(2)体外实验结果显示:在HBE中沉默IL17A能显著下调CSE诱导的IL6、Muc5ac表达以及细胞凋亡水平。在HBE中沉默IL17R及cJun后亦下调CSE诱导的IL6、Muc5ac,此外沉默IL17R同时减少JNK/AP1信号通路的表达。(3)体内实验结果显示:气道上皮特异性敲除IL17A小鼠相较于对照组,BALF中性粒细胞比例及数量、肺组织CXCL1,CXCL2的表达及肺组织气道旁炎症浸润均减少。结论:CSE诱导HBE分泌IL17A后与自身的IL17RA-IL17RC受体结合,通过自分泌/旁分泌的途径,激活JNK/AP1信号通路调节炎症及黏液。此外,这部分来源的IL17A亦可通过促进HBE的凋亡加重气道炎症。体内气道上皮特异性敲除IL17A能够缓解慢阻肺的气道炎症。本课题为慢阻肺发生发展的基础研究提供了新的思路和证据,也为慢阻肺的临床治疗提供了新的方向。