论文部分内容阅读
群体感应(Quorum Sensing,QS)是细菌细胞间通过信号分子进行互相交流的一种现象,群体感应细菌细胞通过分泌并感应周围环境中同类细菌细胞产生的信号分子,当周围环境中的信号分子浓度达到一定浓度值时,信号分子会启动细菌细胞中表达特定性状的基因尤其是很多致病基因的表达,这也给防治某些植物、动物性病原菌带来的疾病提供了一种新思维。群体淬灭(Quorum Quenching,QQ)就是在群体感应基础上而产生的,它主要是通过分解细菌细胞所产生的信号分子,使信号分子浓度在表达特定性状所需浓度范围之内,从而使细菌无法表达特定致病因子,进而防治病害的一种方法。到目前为止,已经发现了很多表达群体淬灭酶的基因,为了寻找新的群体淬灭酶基因,本课题根据前期研究结果,从DSMZ菌种库购买了7株菌进行活化和群体淬灭活性筛选,得到其中6株菌均具有群体淬灭活性,选取其中一株活性最高的菌株DSM16502,菌株鉴定为柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei)。对DSM16502进行鸟枪法构建基因组文库以筛选表达群体淬灭酶的基因,文库中共得到单克隆11646个,筛选后未能找到表达群体淬灭酶的目的基因。通过硫酸铵法沉淀蛋白发现DSM16502所产生的群体淬灭酶能在50%饱和度的硫酸铵溶液中析出沉淀下来;将此饱和度下沉淀的蛋白通过AKTA蛋白纯化系统纯化后,利用纯化的酶蛋白进行酶学性质的初步研究,发现DSM16502所产群体淬灭酶在pH1-4失去活性,在pH5-13始终保持活性,而且Li+、Ni+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Cu2+、Fe2+、Co2+九种金属离子均未对酶活性产生显著影响,此酶最适作用温度在30℃-40℃之间,并且在70℃和80℃温度下仍然具有一定的活性,说明DSM16502所产群体淬灭酶具有较高的应用价值。