目的:为进一步探讨Bcl-2与血管瘤发生、发展的关系及其在生物学治疗中的作用,本课题首先运用免疫组化和原位杂交的方法检测了增生期、退化期血管瘤组织和正常皮肤组织血管中Bcl-2的表达;然后构建了正反义bcl-2的绿色荧光真核表达载体;同时进行了增生期血管瘤的内皮细胞的培养;为我们进一步研究bcl-2在血管瘤发病中的作用机制及其治疗效应奠定了基础。 方法:首先收集武汉大学人民医院病理科1996-2002年皮肤毛细血管瘤存档蜡块49例,蜡块切片厚5μm,常规HE染色和免疫组织化学S-P法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),按Mulliken分类标准并结合PCNA的表达进行分组,增生期血管瘤27例,退化期血管瘤22例,另取瘤组织周围正常皮肤组织5例作对照。运用免疫组织化学染色和原位杂交的方法检测Bcl-2在以上各组中的表达,并结合Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达Bcl-2的这些细胞是血管瘤组织中的内皮细胞。利用HPIAS-2000图像分析系统测定Bcl-2在以上三组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。然后亚克隆构建含GFP的正反义bcl-2的真核表达载体,通过酶切和测序的方法对构建的载体进行鉴定,分别称为PEGFP-Cl-bcl-2和PEGFP-Cl-AS-bcl-2。同时将血管瘤处于增生期患者的瘤组织,通过组织块的方法进行内皮细胞的培养,并通过免疫组织化学S-P法检测Ⅷ因子相关抗原,结合细胞的形态对培养的细胞进行鉴定。 结果:1.Bcl-2在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(P<0.05);Bcl-2在退化期血管瘤内皮细胞的表达与正常皮肤组织血管内皮细胞相比,差异无显著性(P>0.05)。 2.酶切,电泳显示含约0.63kb片段的质粒为反义载体,含约1.3kb片段的质粒为正义载体。正反向测序结果正确。 3.培养的内皮细胞具有内皮细胞岛,成典型的卵石状排列。Ⅷ因子相关抗原检测染色阳性。