肿瘤及凋亡细胞检测的电化学生物传感器研究

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肿瘤的发生严重影响着人们的生活质量,危及着人们的生命安全,实现肿瘤细胞及其生理活动的准确、快速、简便检测,对于疾病的确诊与治疗具有非常重要的意义。目前,有关检测方法已有一些报道,但普遍操作繁琐费时、不易定量、仪器昂贵,且要求工作人员有较高的专业技能。本论文设计建立了几种新型的生物传感器,实现了目标物的高灵敏、快速测定。主要内容如下:(1)利用巯基自组装技术制备了压电核酸适体传感器,建立了一种新的检测人脑星形胶质瘤细胞的方法,同时研究了反应体系的热、动力学行为。研究结果表明:星形胶质瘤细胞与压电石英晶体上的核酸适体探针的结合行为很好地符合Langmuir方程,即它们之间的反应是特异性反应,反应的结合常数为6.67×106M-1,25℃时反应速率常数为1.05×105M-1·s-1。该传感器响应的线性范围为1.55×103~3.64×104个/mL,线性回归方程为△f = -41.6-1.32×10-2c,相关系数为0.997,可用于定性、定量检测人脑星形胶质瘤细胞,从而为肿瘤的定级和诊断提供了依据。(2)通过巯基在金表面的混合自组装,将腱肽蛋白c的核酸适体探针固定于金电极表面。基于腱肽蛋白在胶质瘤细胞表面的高表达,利用细胞与电极表面核酸适体探针的特异性生物识别对铁氰化物电化学阻抗的抑制,建立了胶质瘤细胞检测的核酸适体传感器。考察与优化了核酸适体/巯基丙酸混合自组装比例、反应时间、温度和离子强度等对传感器性能有显著影响的分析条件,结果表明该传感器的阻抗响应与胶质瘤细胞浓度呈线性关系,线性范围为100-50000个细胞/mL,检测限可达50个细胞/mL。(3)基于巯基的自组装和纳米金放大技术,将磷脂酰丝氨酸(PS)的识别蛋白Annexin-V固定在金电极表面,构建了Annexin-V修饰电极。实验中将含PS的脂质体与肿瘤细胞进行整合,构建早期凋亡细胞模型;利用整合得到的早期凋亡细胞与电极表面Annexin-V蛋白的特异性生物识别对铁氰化物电化学阻抗的抑制,构建了检测早期凋亡细胞的无标记型电化学阻抗传感器。考察与优化了反应时间、温度、Ca2+浓度等对传感器性能有显著影响的分析条件,在检测5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡率时,达到了与流式细胞仪检测相近的结果。
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