侧柏体胚发生离体繁殖技术研究

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侧柏(Platycladus orientalis)在我国普遍分布,其根系发达、抗寒耐干旱,具有重要的生态价值。本文以侧柏优树未成熟合子胚为外植体诱导体胚发生,研究了合子胚发育时期、植物生长调节剂种类及浓度、糖类等对胚性愈伤组织诱导的影响,探讨了培养方式、摇床转速、植物生长调节剂对胚性愈伤组织增殖的影响,开展了体胚成熟培养的研究。优化了胚性愈伤组织诱导方案,初步建立了细胞悬浮培养体系。研究表明:(1)合子胚发育至子叶前期,有利于侧柏胚性愈伤组织的诱导;在DCR+4.0mg/L2,4-D+0.5 mg/L6-BA的培养基中,附加10 g/L的蔗糖,胚性愈伤组织诱导率可达16.3%。另外,母树基因型不同,诱导率也存在明显差异。(2)侧柏胚性愈伤组织长时间继代在含2,4-D的固体增殖培养基中,表面会发生水化,质地浓稠失去粘性,甚至会丧失胚性能力。用1 mg/LNAA代替2,4-D,有利于维持胚性能力,合适的继代周期为21 d左右。(3)液体悬浮培养增殖过程中,每100 ml培养基中加入2.0 g胚性愈伤组织,转速为110 r/min,继代周期11 d左右,胚性细胞增殖率最高,可达288%。(4)ABA有利于侧柏体胚成熟,60 um/LABA+100 g/LPEG组合浓度下,体胚成熟率高;不同蔗糖浓度试验不利于体胚成熟,用45 g/L的麦芽糖代替蔗糖,获得了成熟胚。
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