目的:淡豆豉为常用中药,具有解表除烦、宣发郁热的功效。临床上常用于感冒、寒热头疼,烦躁胸闷,虚烦不眠等证的治疗。大豆异黄酮是其中的主要活性成分,具有雌激素样作用。前期研究表明淡豆豉异黄酮对绝经期妇女心血管疾病有一定的治疗作用。为进一步开发淡豆豉资源及研制治疗绝经期妇女心血管疾病的新药,本研究对淡豆豉异黄酮提取、纯化工艺进行优化,并结合药物性质制成淡豆豉异黄酮片。方法:1含量测定方法的研究采用紫外分光光度法,建立淡豆豉总异黄酮的含量测定方法,并进行了方法学研究。采用HPLC法,建立染料木素的含量测定方法,并进行了方法学研究。2提取、分离、纯化工艺研究以淡豆豉总异黄酮和染料木素为考察指标,通过单因素提取溶媒考察,优化选出最佳提取溶媒;采用L9(34)正交试验设计优选淡豆豉总异黄酮的提取工艺,结合实际生产情况进行提取工艺的验证试验,通过验证试验,确定淡豆豉总异黄酮的提取工艺。采用大孔吸附树脂对淡豆豉总异黄酮进行分离和纯化。采用静态分析和动态分析的方法对不同型号不同厂家的大孔树脂进行筛选,确定适合分离淡豆豉异黄酮的树脂型号,并对影响大孔树脂吸附量和洗脱率的各因素:药液的浓度,上样速度,最大上样量,水洗脱用量,洗脱乙醇浓度,洗脱溶剂用量,洗脱速度进行了考察,最终确定了大孔吸附树脂分离纯化淡豆豉异黄酮的工艺条件。3片剂的成型工艺研究通过对粘合剂、崩解剂、润滑剂型号进行考察,确定片剂的处方。并且对乙醇浓度(75%,80%,85%,95%)、PVP浓度(1%,3%,5%,10%),羧甲基纤维素钠,硬脂酸美的用量进行考察,最终确定了片剂的成型工艺。结果:1建立紫外分光光度法测总异黄酮及HPLC测染料木素的含量测定方法1.1紫外分光光度法测定总异黄酮的含量对照品溶液的制备:精密称取染料木素对照品适量,加甲醇制成每1ml含染料木素3.864μg/ml的溶液,即得。供试品溶液的制备:精密吸取提取液5ml蒸干,用15ml水溶解,用乙酸乙酯萃取6次,每次25ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,用甲醇定容到50ml的量瓶中,既得。检测波长的选择:采用二极管阵列检测器对供试品溶液和对照品溶液在200nm-700nm之间进行光谱扫描,二者在261nm处有最大吸收,确定最大吸收波。测定法:将对照品溶液和供试品溶液用紫外分光光计进行测定,即得。1.2 HPLC法测定染料木素的含量色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-0.1%冰醋酸水(57:43)为流动相,检测波长:261nm,流速:1ml/min。理论塔板数按染料木素峰计算不低于3000。对照品溶液的制备:精密称取染料木素对照品适量,加甲醇制成每1ml含染料木素9.92μg/ml,即得。供试品溶液的制备:将淡豆豉提取液用0.45μm的微孔滤膜过滤,即得。测定法:精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。2提取、分离、纯化研究结果2.1提取工艺考察结果通过单因素考察和正交试验优选出淡豆豉异黄酮的提取工艺为:加8倍量70%乙醇回流提取3次,每次2小时,合并提取液回收乙醇,得浓度为0.1g/ml的溶液。2.2分离、纯化工艺考察结果采用静态吸附和动态吸附的方法筛选出HPD500大孔吸附树脂为纯化树脂,其吸附量和洗脱率均高于其他树脂。通过考察,HPD500大孔吸附树脂的纯化工艺为:药液的浓度为0.15g生药/ml,以4BV/h的流速通过HPD500大孔吸附树脂,最大吸附量为1.17g生药/ml树脂。先以12倍柱体积的水洗脱,继以15倍柱体积的70%乙醇洗脱,洗脱流速为4BV/h,收集洗脱液,置减压干燥箱中烘至完全干燥,取出,粉碎成80目粉末。3片剂成型工艺研究结果通过对片剂成型工艺的研究,初步确定片剂的成型工艺为:取经大孔吸附树脂纯化后的淡豆豉异黄酮粉末及辅料淀粉、羧甲基淀粉钠,用80%乙醇制备的5%的PVP湿法制粒,烘干,用20目的筛网整粒,加入维生素C及适量的硬脂酸美进行压片。经该工艺压制的片剂外观光滑,为浅棕色,崩解度较好,说明该工艺可行。结论:通过对紫外分光光度法测定总异黄酮及HPLC法测定染料木素的方法进行方法学考察,得出该方法稳定、可靠,可用于总异黄酮及染料木素的测定。通过对淡豆豉提取纯化工艺的考察得出优化工艺为:淡豆豉药材加8倍量70%乙醇回流提取3次,每次2小时,合并提取液回收乙醇,得浓度为0.15g/ml的溶液,以4BV/h的流速通过HPD500大孔吸附树脂,先以12倍柱体积的水洗脱,继以15倍柱体积的70%乙醇洗脱。通过对处方设计和成型工艺优化的考察,将提取物加入适量淀粉、羧甲基淀粉钠,用80%乙醇制备的5%的PVP制粒,加入维生素C及适量的硬脂酸美进行压片,制备的总异黄酮片符合片剂要求。