论文部分内容阅读
目的:探讨GCH1抑制剂DAHP对LPS诱导的BV2小胶质细胞自噬表达水平的影响。方法:本研究选取处于对数生长期的生长状态良好的小鼠BV2小胶质细胞为研究对象,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预建立神经炎症性疼痛细胞模型。按照不同的干预方法将小胶质细胞分为以下四组:正常对照组、LPS诱导活化组、LPS诱导+DAHP组、DAHP组。通过RT-PCR技术检测GCH1、LC3B、Beclin1在mRNA水平上的表达;通过Western Blot技术检测GCH1、LC3B、Beclin1在蛋白质水平上的表达。结果:1.未经干预过的BV2小胶质细胞形态特征表现为体积较小的圆形或卵圆形,细胞结构完整,生长状态较好,呈贴壁生长,而LPS干预后的BV2小胶质细胞形态特征变化较大,多数细胞从较小的圆形、卵圆形趋化成体积较大形态不规则的分枝状。DAHP干预后的BV2小胶质细胞形态较未干预前其形态变化不明显。2.RT-PCR结果显示:与正常组相比,LPS诱导活化组GCH1、LC3B、Beclin1的mRNA表达明显增加,差异具有显著统计学意义;与LPS诱导活化组相比,LPS+DAHP组可以明显降低GCH1、LC3B、Beclin1的mRNA表达,差异具有统计学意义;与正常组相比,DAHP组可以降低GCH1的mRNA的表达,差异具有统计学意义,而Beclin1、LC3B的mRNA表达变化无明显差异。3.Western Blot结果显示:与正常组相比,LPS诱导活化组GCH1、LC3B、Beclin1蛋白的表达水平明显增加,差异具有显著统计学意义;LPS诱导+DAHP组与LPS诱导活化组相比,DAHP可以明显降低GCH1、LC3B、Beclin1的蛋白表达,差异具有统计学意义;DAHP组与正常组相比GCH1表达降低,差异具有统计学意义,而LC3B、Beclin1的蛋白表达无明显差异。结论:在LPS诱导BV2小胶质细胞活化的神经炎症性疼痛模型中,LPS干预后的BV2小胶质细胞中GCH1的表达水平明显增加,成功建立LPS诱导小胶质细胞活化的神经炎症性疼痛细胞模型。该细胞模型中,LC3B、Beclin1表达水平均明显增加,表明LPS诱导BV2小胶质细胞自噬;GCH1抑制剂DAHP能够降低正常BV2小胶质细胞中GCH1的mRNA和蛋白质表达水平,同时也降低了LPS诱导活化小胶质细胞内GCH1的表达水平,并能够下调自噬相关蛋白LC3B、Beclin1的mRNA和蛋白质的表达水平,表明DAHP能够抑制神经炎症性疼痛细胞模型的自噬水平,降低细胞过度自噬引起的小胶质细胞损伤。该研究结果表明GCH1可能通过调节小胶质细胞自噬途径来参与神经病理性疼痛的发生,这将为临床对神经病理疼痛的治疗提供新的靶点。