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背景:目前双特异性抗体是肿瘤免疫治疗的热点研究内容。在肿瘤靶向治疗中,常见的双特异性抗体含有两个抗原的结合位点,其中一个靶向效应细胞表面抗原,另一个靶向肿瘤细胞相关抗原。CD3是常见的T细胞靶向抗原,其在T细胞表面均有表达,而且CD3复合体具有触发T细胞的潜能,因此靶向CD3的双特异性抗体被广泛研究。并有研究表明CD87的表达水平与肿瘤的恶性程度有关。在人恶性肿瘤组织中CD87的表达水平远高于其在正常组织中的表达水平,因此我们选择CD87作为单链双特异性抗体(scBsAb)的另一个作用靶点。方法:首先,通过SnapGene Viewer软件将抗人CD3单克隆抗体的重链、轻链与抗人CD87单克隆抗体的重链、轻链交叉连接,以基因合成的方式获得scBsAb的基因片段。然后利用分子生物学手段构建pET24a/scBsAb,先将重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导蛋白表达。获得的工程菌经超声破碎,先在变性条件下亲和纯化目的蛋白,再采用稀释复性方法对scBsAb进行复性。利用SDS-PAGE及Western Blotting检测、鉴定目的蛋白。其次,利用流式细胞术检测纯化的scBsAb与两种相应抗原的结合情况,并测定scBsAb介导的细胞毒作用。采用商品化ELISA试剂盒测定scBsAb介导人外周血单个核细胞(PBMCs)发挥靶向CD87阳性肿瘤细胞杀伤的过程中IFN-y水平。结果:利用基因工程手段,我们获得了较高纯度的scBsAb。与对照相比,scBsAb能与PC-3细胞表面CD87特异性结合,并能与CD3特异性结合;scBsAb的浓度及效靶比影响scBsAb介导的杀伤作用。在效靶比为10:1,scBsAb浓度为100 μg/mL时最大杀伤率达到40.86%;在scBsAb浓度为100 μg/mL,效靶比为40:1时最大杀伤率达到60.9%。此外,ELISA检测实验表明,在scBsAb介导PBMCs发挥靶向CD87阳性肿瘤细胞杀伤的过程中IFN-γ的分泌显著提高。可见scBsAb在体外能够有效介导PBMCs杀伤CD87阳性肿瘤细胞。结论:在本研究中,我们利用大肠杆菌表达系统纯化获得了抗人CD3×CD87单链双特异性抗体,并对其生物学活性进行研究。我们发现scBsAb能够与PC-3细胞表面CD87特异性结合,并且能与CD3特异性结合。通过体外研究我们还发现scBsAb能够介导PBMCs发挥靶向CD87阳性肿瘤的胞毒作用。这些都为进一步的体内实验和抗CD3×CD87单链双特异性抗体的临床应用奠定了基础。