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单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LMO)是一种能引起人类脑膜炎、败血症、流产等疾患,可致孕畜流产,几乎可污染所有食品的冷细菌,可在1-4℃条件下生长。上世纪80年代初LMO被列为食源性致病菌,并认为是一种分布十分广泛的食源性致病菌。上世纪90年代LMO又被WHO列为食品四大致病菌之一。我国淡水水生生物资源丰富,冷冻淡水水产品出口量逐年增加。LMO是保证出口冷冻淡水水产品质量安全的必检项目,目前检测LMO的SN0184-93方法需5-14d,mini-VIDAS等仪器检测方法需要特殊试剂且检测成本高。要有效控制LMO污染,除了建立快速、灵敏的检测方法外,更重要的是要对LMO污染的发生、传播和流行规律进行研究。这就需要有一种快速、可重复及分辨率高的分型系统对LMO进行有效的分型。因此,本研究针对单增李斯特菌快速检测方法和基因分型开展了以下工作:1.以hly和iap基因为靶基因设计引物,进而建立了检测淡水水产品中LMO的双重PCR检测方法。2.对建立的方法进行特异性、敏感性和干扰试验。结果表明:该方法具有较高的特异性和敏感性,并能有效排除检测工作中多种常见致病菌的干扰。3.利用本方法对120份冷冻淡水水产品样本进行检测,结果显示其与SN0184-93方法和mini-VIDAS方法的一致性达100%,但比SN0184-93方法快、比mini-VIDAS检测成本低,适合于出入境口岸大样本检验。4.本研究还以LMO 16S-23S rRNA间断序列为目的基因序列,对来自湖北省不同地区,不同水产品样品的LMO分离株间断序列进行研究;以此探讨污染湖北省水产品的LMO菌株间的亲缘关系和追踪水产品中LMO污染途径和路线。5.间断序列分析结果显示:47株LMO分离株可分为3大类,16个基因亚型;碱基突变和插入序列的变化与样本种类和样本地区来源有明显关联。