【摘 要】
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该课题是以该实验室建立的第一代腺病毒载体介导的人FIX基因高效表达的基础上,用缺失所有腺病毒结构基因、同时携带狗FIX基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的微型腺病毒载体(mAd),
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该课题是以该实验室建立的第一代腺病毒载体介导的人FIX基因高效表达的基础上,用缺失所有腺病毒结构基因、同时携带狗FIX基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的微型腺病毒载体(mAd),进行离体、活体表达的尝试,以期达到延长外源基因的表达时间,降低腺病毒免疫原性的目的.通过在293包装细胞内扩增微型腺病毒载体(mAd)及辅助性腺病毒(AdHβ),并氯化铯梯度超离心纯化后,得到了以mAd为主及以AdHβ为主的两种腺病毒纯化液.通过PCR方法及常见石蜡包埋切片方法,未检测出宿主细胞内有复制活性的腺病毒,小鼠各脏器未见明显毒性反应.以上结果显示:mAd介导的dFIX基因在离体及活体内均有高效表达,初步安全性检测无明显毒性,但由于mAd在纯化时,与AdHβ不能完全分开,导致mAd中有约1﹪的AdHβ的污染,最终导致FIX在表达14周后初步被清除,因此,在将来的基因治疗的应用中,mAd本身的稳定性及应用系统还需要做一定的改进,以适应高效、安全、稳定的表达载体的要求.
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